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一种测定血浆中乌金苷浓度的方法
| 专利名称： | 一种测定血浆中乌金苷浓度的方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种测定血浆中乌金苷浓度的方法，采用液质联用系统测定，先取待测样品，加入一定量的有机溶媒蛋白沉淀剂进行蛋白沉淀，预处理后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测，本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，适合于测定血浆中乌金苷的浓度。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 江苏;32 |
| 申请人： | 江苏省中医院 |
| 发明人： | 戴国梁;张农山;居文政;刘史佳;高骁君;于茜;吴磊 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2019-09-24T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-11-15T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201910907856.X |
| 公开号： | CN110455967A |
| 代理机构： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) |
| 代理人： | 孙斌 |
| 分类号： | G01N30/06(2006.01);G;G01;G01N;G01N30 |
| 申请人地址： | 210029江苏省南京市汉中路155号 |
| 主权项： | 1.一种测定血浆中乌金苷浓度的方法，其特征在于，由血浆样品经预处理后经液质联用系统检测其浓度，具体方法包括如下步骤： (1)血浆样品预处理：取血浆样品，加入内标柚皮素甲醇溶液，再加入甲醇或乙腈进行蛋白沉淀，离心后取上清液； (2)将步骤(1)预处理后的血浆样品进行液相色谱分离：色谱条件中色谱柱为WatersXTerra MS C18柱；流动相：体积比为80:20的乙腈与2mmol·L-1醋酸铵水溶液；流速：0.2-0.5mL·min-1；柱温：30-40℃；进样量：5μL；洗脱方式为等度洗脱； (3)质谱测定，条件为：离子源：电喷雾离子化电离源ESI；离子检测方式：多反应监测MRM；离子极性：负离子；离子源电压：-4000V；离子源温度：400℃；气帘气Curtain gas：20psi；离子源Gas 1：50psi；离子源Gas 2：60psi；CXP：-9V；EP：-10V；脱溶剂气和锥孔气均为高纯氮气；检测对象的离子通道：乌金苷，[M-H]-，m/z 433.1→160.9，Dwell(驻留时间)150，DP(去簇电压)-92，Collision Energy(碰撞能量)-35；内标柚皮素，[M-H]-，m/z 270.9→150.8，Dwell(驻留时间)150，DP(去簇电压)-86，Collision Energy(碰撞能量)-25。 (4)计算：采用内标法，以乌金苷和内标柚皮素的峰面积比值代入标准曲线方程计算乌金苷的浓度。 2.根据权利要求1所述的测定血浆中乌金苷浓度的方法，其特征在于，步骤(1)中所述取血浆样品50μL，优选加入内标200ng·mL-1柚皮素甲醇溶液10μL和300μL甲醇或乙腈，振荡3min进行蛋白沉淀，12000rpm离心10min，离心后取上清液。 3.根据权利要求1所述的测定血浆中乌金苷浓度的方法，其特征在于，步骤(2)中所述色谱柱长度为50mm，内径为2.1mm，填料粒径为3.5μm。 4.根据权利要求1所述的测定血浆中乌金苷浓度的方法，其特征在于，所述的血浆为给予了含乌金苷药物的血浆。 5.根据权利要求1所述的测定血浆中乌金苷浓度的方法，其特征在于，所述血浆为人或动物的血浆。 6.根据权利要求1所述的测定血浆中乌金苷浓度的方法，其特征在于，所述血浆为大鼠血浆。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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