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测定犬血浆中Sodium Danshensu和Prunasin的浓度的方法
| 专利名称： | 测定犬血浆中Sodium Danshensu和Prunasin的浓度的方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种HPLC‑MS/MS法测定犬血浆中Sodium Danshensu和Prunasin的浓度的方法，PHLC‑MS/MS分析测定过程的工作条件包括PHLC和色谱条件，通过色谱柱、溶解液、流动相、保留时间等工艺条件的优化，使得整个测试过程更加可行，测量结果增加准确，减少了残留，提高了准确度以及回收率高，减小了基质效应以及干扰性。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 申请人： | 安领生物医药(苏州)有限公司 |
| 发明人： | 王樱桃;魏征 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 1900-01-20T00:00:00+0805 |
| 发布日期： | 1900-01-20T00:00:00+0805 |
| 申请号： | CN201911421546.3 |
| 公开号： | CN111198234A |
| 代理机构： | 苏州隆恒知识产权代理事务所(普通合伙) |
| 代理人： | 周子轶 |
| 分类号： | G01N30/02;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/72;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/72 |
| 申请人地址： | 215000 江苏省苏州市工业园区金鸡湖大道99号11栋504室 |
| 主权项： | 1.一种HPLC-MS/MS法测定犬血浆中Sodium Danshensu和Prunasin的浓度的方法，其特征在于， PHLC-MS/MS分析测定过程的工作条件 (1)、PHLC条件： 色谱柱：InertStain AQ-C18(2.1mm x 50mm,5.0μm),SHIMADZU； 柱温：35℃； 流动相A：0.1％乙酸-水溶液； 流动相B：甲醇-乙腈溶液(7/3，v/v)； 进样体积：3.00μL； 运行时间：4.80min； 保留时间：Sodium Danshensu，大约1.68min；Prunasin，大约1.82min；Osalmide，大约2.04min； (2)、质谱条件： 质谱仪：AB SCIEX API5000LC/MS/MS system； 离子源：ESI电喷雾电离； 离子化模式：Negative； 涡旋离子喷雾温度：550℃。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步骤： (1)对Sodium Danshensu、Prunasin和Osalmide各取1.00mg/mL，并且分别溶于甲醇中，配置得到Sodium Danshensu储备液、Prunasin储备液和Osalmide储备液，≤-15℃密闭，遮光保存，其中Osalmide作为内标； 将所述Sodium Danshensu储备液和所述Prunasin储备液分别用甲醇溶液稀释成浓度为2*105、1.6*105ng/mL的校正标示样品工作液；将所述Sodium Danshensu和所述Prunasin等浓度混合，再用甲醇溶液稀释成浓度为4*104、1.6*104、1600、400、200ng/mL的校正标示样品工作液； 将所述Sodium Danshensu储备液和所述Prunasin储备液分别用甲醇溶液稀释成浓度为1.5*105、1.0*105ng/mL的质控工作液；将所述Sodium Danshensu和所述Prunasin混合再用甲醇溶液稀释成浓度为6*104、600、200ng/mL的质控工作液； 将所述Osalmide储备液用甲醇溶液稀释成浓度为1*104、50ng/mL的内标工作液； 将所述校正标示样品工作液用空白基质稀释成浓度为1*104、8000、2000、800、80、20、10ng/mL的所述校正标示样，所述空白基质为不含分析物与内标的犬血浆，在本实施例中指不含Sodium Danshensu、Prunasin和Osalmide； 将所述质控工作液用所述空白基质稀释成浓度为7500、5000、300、30、10ng/mL的所述质控样品； (2)样品处理：取等体积的所述校正标示样和所述质控样品，分别加入270μL的50ng/mL所述内标工作液，封板后涡旋混匀离心，离心后取上清液150μL至所述96孔板中，并加入100μL的甲醇溶液。然后再密封孔板，进行低速涡旋混匀，取3.0μL在高效液相质谱联用仪(HPLC-MS/MS)上进样分析； (3)标准曲线的制作：以Y＝aX+b制作标准曲线，X为分析物浓度，Y为色谱峰面积比； (4)定量分析：根据步骤(2)对待测样品进行处理，并按照步骤(3)所得所述标准曲线计算得到所述待测样品中的Sodium Danshensu、Prunasin的浓度。 3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的离心条件为：10℃，4000rpm，离心10min。 4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中还包括对空白(BK)样品的处理：吸取30μL的空白基质，加入270μL的甲醇溶液，封板后涡旋混匀，在10℃，4000rpm条件下离心10min，离心后取上清液150μL至所述96孔板中，并加入100μL的甲醇溶液，然后再密封孔板，进行低速涡旋混匀，取3.0μL进行分析。 5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中还包括对QC0样品的处理：吸取30μL空白基质，再加入270μL所述内标工作液，封板后涡旋混匀，在10℃，4000rpm条件下离心10min，离心后取上清液150μL至所述96孔板中，并加入100μL的甲醇溶液，然后再密封孔板，进行低速涡旋混匀，取3.0μL进行分析。 6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中还包括对ULOQ without IS样品的处理：最高定量限不含内标的空白基质，加入270μL的甲醇溶液，封板后涡旋混匀，在10℃，4000rpm条件下离心10min，离心后取上清液150μL至所述96孔板中，并加入100μL的甲醇溶液。然后再密封孔板，进行低速涡旋混匀，取3.0μL进行分析。 7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中还包括对基质效应样品的处理：取单个供体(n≥6)的30μL的空白基质，并加入270μL甲醇溶液，涡旋离心后取上清液150μL，并加入100μL Neat溶液，然后再密封孔板，进行低速涡旋混匀，取3.0μL进行分析。 8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中还包括对回收率样品的处理：取单个供体的空白基质，再取30μL的多个供体的混合的所述空白基质形成所述回收率样品，并加入270μL甲醇溶液，涡旋离心后取上清液150μL，并加入100μL Neat溶液，然后再密封孔板，进行低速涡旋混匀，取3.0μL进行分析。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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