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原文传递一种荷丹片的质量检测方法

专利名称：	一种荷丹片的质量检测方法
摘要：	本发明涉及荷丹片的质量检测方法。本发明所述检测方法包括荷叶、补骨脂、丹参、山楂和番泻叶的薄层鉴别，其中，荷叶的薄层鉴别：取本品薄膜衣片，加氨试液溶解，加二氯甲烷振摇提取，二氯甲烷液浓缩，用盐酸溶液萃取，酸水液用浓氨试液调节pH值，再用二氯甲烷液振摇提取，二氯甲烷液蒸干，残渣加二氯甲烷溶解，作为供试品溶液，另取荷叶碱对照品，加二氯甲烷制成对照品溶液，照薄层色谱法试验，分别吸取上述两种供试品溶液，点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇:醋酸:水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以显色剂，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同顏色的斑点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江西;36
申请人：	南昌济顺制药有限公司
发明人：	王跃飞;丁佳敏;王丹妮;曾英姿;安少凯;赵磊
专利状态：	有效
申请日期：	2019-09-20T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-22T00:00:00+0800
申请号：	CN201910890137.1
公开号：	CN110487951A
代理机构：	北京华科联合专利事务所(普通合伙)
代理人：	王为;孟旭
分类号：	G01N30/90(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	330115 江西省南昌市桑海经济开发区新祺周荣欣大道
主权项：	1.一种荷丹片的质量检测方法，其特征在于，所述检测方法包括荷叶、补骨脂、丹参、山楂和番泻叶的薄层鉴别，荷叶的薄层鉴别： (1)取本品薄膜衣片，加氨试液溶解，加二氯甲烷振摇提取，二氯甲烷液浓缩，用盐酸溶液萃取，酸水液用浓氨试液调节pH值至9～10，再用二氯甲烷液振摇提取，二氯甲烷液蒸干，残渣加二氯甲烷溶解，作为供试品溶液，另取荷叶碱对照品，加二氯甲烷制成对照品溶液，照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，分别吸取上述两种供试品溶液，点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇:醋酸:水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以显色剂，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同顏色的斑点，补骨脂的薄层鉴别： (2)取本品薄膜衣片，加乙醇超声提取，放冷，滤过，蒸干，残渣加乙醇溶解作为供试品溶液，取补骨脂对照药材同法制得对照药材溶液，另取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加乙醇制成混合溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取上述三种溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以显色剂，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同的两个荧光斑点，丹参的薄层鉴别： (3)取本品薄膜衣片，加乙醇超声提取，过滤，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯溶解作为供试品溶液，取丹参对照药材同法制得对照药材溶液，另取丹参酮ⅡA对照品，加乙醇制成对照品溶液，照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚:乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点，山楂的薄层鉴别： (4)取本品薄膜衣片，加甲醇加热回流，过滤，滤液挥干，残渣加水溶解，用乙酸乙酯振摇提取，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇溶解作为供试品溶液，另取山楂对照药材加水提取，滤过，浓缩，用乙酸乙酯振摇提取，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷:乙酸乙酯:甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以显色剂，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，番泻叶的薄层鉴别： (5)取本品薄膜衣片，加甲醇-乙酸乙酯混合溶液加热回流，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解作为供试品溶液，取番泻叶对照药材加甲醇加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，滤过，滤液用二氯甲烷振摇提取，二氯甲烷液用碳酸钠溶液振摇提取，碳酸钠溶液用盐酸调节pH值至2，再用二氯甲烷振摇提取，二氯甲烷溶液用水洗涤，蒸干，残渣加甲醇溶解作为对照药材溶液，照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取上述供试品溶液与对照药材溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷:乙酸乙酯:甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，置氨蒸气中熏后，斑点变成红色。 2.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，荷叶的薄层鉴别，步骤如下：取本品薄膜衣片3g，研细，加氨试液20mL溶解，加二氯甲烷振摇提取3次，每次30mL，合并二氯甲烷液，浓缩至约10mL用0.01mol/L的盐酸溶液20mL萃取，弃去二氯甲烷液，酸水液用浓氨试液调节pH值至9～10，再用二氯甲烷液振摇提取3次，每次10mL，合并二氯甲烷液，蒸干，残渣加二氯甲烷l mL使溶解，作为供试品溶液，另取荷叶碱对照品，加二氯甲烷制成每l mL含0.3mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，分别吸取上述两种供试品溶液6μL、10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-醋酸-水(4:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同顏色的斑点。 3.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，补骨脂的薄层鉴别，步骤如下：取本品薄膜衣片2g，研细，加乙醇10mL，超声15分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2mL使溶解，作为供试品溶液，取补骨脂对照药材粉末0.5g，同法制得对照药材溶液，另取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加乙醇制成每1mL含2mg的混合溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取上述三种溶液各2～5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(4:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％氢氧化钾乙醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同的两个荧光斑点。 4.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，丹参的薄层鉴别，步骤如下：取本品薄膜衣片2g，研细，加乙醇10mL，超声15分钟，过滤，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液，取丹参对照药材粉末0.5g，同法制得对照药材溶液，另取丹参酮ⅡA对照品，加乙醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取上述供试品溶液10μL、对照药材溶液和对照品溶液各5μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)∶乙酸乙酯(4:1)为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。 5.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，山楂的薄层鉴别，步骤如下：取本品薄膜衣片1.2g，研细，加甲醇50mL，加热回流30分钟，过滤，滤液挥干，残渣加水20mL使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液，另取山楂对照药材4g，加水100mL，煎煮1小时，滤过，滤液浓缩至20mL，用稀盐酸调节pH值至1～2，用乙酸乙酯振摇提取2次，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取供试品溶液10μL、对照药材溶液20μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷-乙酸乙酯-甲酸(20:20:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 6.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，番泻叶的薄层鉴别，步骤如下：取本品薄膜衣片1.5g，研细，加甲醇-乙酸乙酯(1:1)的混合溶液15mL，加热回流15分钟，放冷，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液，取番泻叶对照药材0.5g，加甲醇15mL，加热回流15分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水15mL使溶解，滤过，滤液用二氯甲烷振摇提取2次，每次15mL，合并二氯甲烷液，用5％碳酸钠溶液25mL振摇提取，弃去二氯甲烷液，碳酸钠溶液用盐酸调节pH值至2，再用二氯甲烷30mL振摇提取，分取二氯甲烷液，用水洗涤2次，每次30mL，二氯甲烷溶液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为对照药材溶液，照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取上述供试品溶液与对照药材溶液各10μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸(30:10:1)为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，置氨蒸气中熏后，斑点变成红色。 7.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，对番泻叶中的大黄酸进行了限量测定，其中大黄酸限量测定方法如下：色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.1％甲酸水溶液(31:69)为流动相；检测波长为254nm，理论板数按大黄酸峰计算应不低于5000，对照品溶液的制备取大黄酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含1μg的溶液，即得，供试品溶液的制备取本品薄膜衣片24片，研细，取约0.5g，精密称定，置于25mL容量瓶中，加甲醇适量，超声处理20分钟，取出，放至室温，并定容至刻度，摇匀，14000rpm离心10分钟，取上清液，即得，测定法分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各2μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得，本品每片含番泻叶以大黄酸(C15H18O6)计，不得过0.10mg。 8.根据权利要求7所述的质量检测方法，其特征在于，还包括对补骨脂中的补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂苷、异补骨脂苷进行了含量测定： (1)补骨脂素、异补骨脂素色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(20:80)为流动相；检测波长为246nm，柱温60℃，流速0.3mL/min，理论板数按补骨脂素、异补骨脂素峰计算应不低于5000，对照品溶液的制备取补骨脂素、异补骨脂素对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1mL各含5μg的混合对照品溶液，即得，供试品溶液的制备取本品薄膜衣片24片，研细，取约0.5g，精密称定，置于25mL容量瓶中，加甲醇适量，超声处理15分钟，取出，放至室温，并定容至刻度，摇匀，14000rpm离心10分钟，取上清液，即得，测定法分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各2μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得， (2)补骨脂苷、异补骨脂苷色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1％甲酸水溶液(15.7:84.3)为流动相；检测波长为246nm，柱温50℃，流速0.3mL/min，理论板数按补骨脂苷计算应不低于5000，对照品溶液的制备取补骨脂苷、异补骨脂苷对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1mL分别含12μg、8μg的混合对照品溶液，即得，供试品溶液的制备取本品薄膜衣片24片，研细，取约0.5g，精密称定，置于25mL容量瓶中，加甲醇适量，超声处理20分钟，取出，放至室温，并定容至刻度，摇匀，取5mL置10mL容量瓶中，用10％甲醇定容至刻度，摇匀，14000rpm离心10分钟，取上清液，即得，测定法分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各2μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得，本品每片含盐补骨脂以游离型补骨脂素(C11H6O3)和异补骨脂素(C11H6O3)总量计，薄膜衣片每片不得少于0.21mg；本品每片含盐补骨脂以游离型和结合型补骨脂素(C11H6O3)和异补骨脂素(C11H6O3)(补骨脂苷、异补骨脂苷与补骨脂素、异补骨脂素的折算系数0.5082)总量计，薄膜衣片每片不得多于3.38mg。 9.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，还包括对丹参中的有效成分丹酚酸B进行了含量测定，其中丹酚酸B含量测定方法如下：色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％甲酸水溶液(18:82)为流动相；检测波长为286nm，柱温50℃，流速0.3mL/min，理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于5000，对照品溶液的制备取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加75％甲醇制成每1mL含29μg的溶液，即得，供试品溶液的制备取本品薄膜衣片24片，研细，取约0.5g，精密称定，置于50mL容量瓶中，加75％甲醇适量，超声处理20分钟，取出，放置室温，并定容至刻度，摇匀，取5mL置10mL容量瓶中50％甲醇定容至刻度，混匀，14000rpm离心10分钟，取上清液，即得，测定法分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各2μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得，本品每片含丹参以丹酚酸B(C36H30O16)计，薄膜衣片每片不得少于1.37mg。 10.根据权利要求9所述的质量检测方法，其特征在于，荷叶中的有效成分荷叶碱的含量测定方法如下：色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(27:70.6:1.6:0.78)为流动相；检测波长为270nm，理论板数按荷叶碱峰计算应不低于2000，对照品溶液的制备取荷叶碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含16μg的溶液，即得，供试品溶液的制备取本品薄膜衣片24片，研细，取约0.4g，精密称定，用加浓氨试液5mL湿润，加三氯甲烷60mL，加热回流3小时，放冷，移至分液漏斗中，分取三氯甲烷层，余留物再用三氯甲烷25mL分3次振摇提取，合并三氯甲烷液，回收三氯甲烷至干，残渣用乙醇溶解，转移至10mL量瓶中，加乙醇至刻度，滤过，取续滤液，即得，测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定，即得，本品每片含荷叶以荷叶碱(C19H21NO3)计，薄膜衣片每片不得少于0.25mg。
所属类别：	发明专利