详情

原文传递一种卵黄免疫球蛋白的检测方法

专利名称：	一种卵黄免疫球蛋白的检测方法
摘要：	本发明涉及一种卵黄免疫球蛋白的检测方法，包括以下步骤：(1)将配制好的浓缩胶进行灌胶，将变性后的已知浓度的蛋白样品分别加入多个上样孔中；(2)将上样后的蛋白样品进行电泳；(3)将电泳后的整块胶放置于活化后的固相支持物上，然后转移至加有冰块的转膜缓冲液中，进行转膜；(4)将转膜后的固相支持物进行封闭；(5)将封闭后的固相支持物进行清洗，然后用含有HRP的IgY抗体进行抗体敷育；(6)将抗体敷育后的固相支持物进行清洗，然后采用ECL显色液进行显色，并采用化学发光显影仪进行显影成像；(7)将显影成像获得的图片进行灰度分析。本发明的IgY的检测方法不仅可对IgY的含量进行检测，还可对其纯度进行分析。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	福建;35
申请人：	福建医科大学
发明人：	张南文;黄丽珊;闫梦茹;刘蕊;张鑫;于鹤;陈智婕;陈晓乐
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-09T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-19T00:00:00+0800
申请号：	CN201910733486.2
公开号：	CN110470846A
代理机构：	福州市博深专利事务所(普通合伙)
代理人：	柯玉珊
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	350122 福建省福州市大学新区学府北路1号
主权项：	1.一种卵黄免疫球蛋白的检测方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)将配制好的浓缩胶进行灌胶，待浓缩胶凝固后，将制胶板转移至电泳槽中，加满电泳缓冲液后取下梳子，将变性后的已知浓度的蛋白样品分别加入多个上样孔中，且每个上样孔中的蛋白样品的含量相同； (2)将步骤(1)上样后的蛋白样品进行电泳； (3)将步骤(2)电泳后的整块胶放置于活化后的固相支持物上，然后转移至加有冰块的转膜缓冲液中，进行转膜； (4)将步骤(3)转膜后的固相支持物进行封闭； (5)将步骤(4)封闭后的固相支持物进行清洗，然后用含有HRP的抗IgY抗体进行抗体敷育； (6)将步骤(5)抗体敷育后的固相支持物进行清洗，然后采用显色液进行显色，并采用化学发光显影仪进行显影成像； (7)将步骤(6)显影成像获得的图片进行灰度分析。 2.根据权利要求1所述的卵黄免疫球蛋白的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述变性后的已知浓度的蛋白样品的制备方法具体为：将已知浓度的蛋白样品按照体积比为1:4的比例与5倍浓度的上样缓冲液混合，然后于95℃条件下金属浴5min，进行变性，再置于-80℃条件下进行保存。 3.根据权利要求1所述的卵黄免疫球蛋白的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，蛋白样品加入上样孔时，在另一个上样孔中加入marker。 4.根据权利要求1所述的卵黄免疫球蛋白的检测方法，其特征在于，步骤(1)具体为：依次进行清洗玻璃板和检漏，然后将配制好的浓缩胶进行灌胶，待浓缩胶凝固后，将制胶板转移到电泳槽中，加满电泳缓冲液后取下梳子，将已变性的已知浓度的蛋白样品分别加入多个上样孔中。 5.根据权利要求1所述的卵黄免疫球蛋白的检测方法，其特征在于，步骤(2)具体为：在电泳盒中加入电泳缓冲液，组装好电泳仪后，于80V恒压条件下进行电泳，待蛋白样品跑至胶底部时，停止电泳。 6.根据权利要求1所述的卵黄免疫球蛋白的检测方法，其特征在于，步骤(3)中，所述固相支持物为PVDF膜，所述固相支持物采用甲醇进行活化。 7.根据权利要求1所述的卵黄免疫球蛋白的检测方法，其特征在于，步骤(3)具体为：将电泳后的整块胶置于用甲醇活化后的固相支持物上，用转膜夹转移至加满转膜缓冲液的电泳盒中，在电泳盒中放入适量冰袋，组装好仪器后将其电泳盒于冰上，于106V的条件下进行转膜90min。 8.根据权利要求1所述的卵黄免疫球蛋白的检测方法，其特征在于，步骤(4)具体为：将固相支持物置于用TBST配置的浓度为5％的脱脂奶粉中进行封闭，封闭时间为2-4h。 9.根据权利要求1所述的卵黄免疫球蛋白的检测方法，其特征在于，步骤(5)中，所述清洗具体为：采用TBST对封闭后的固相支持物清洗至少两次；所述抗体敷育的条件为：于3.5-4.5℃条件下敷育12-16h，或者于20-30℃条件下敷育3.8-4.2h。 10.根据权利要求1所述的卵黄免疫球蛋白的检测方法，其特征在于，步骤(6)中，所述清洗具体为：采用TBST对抗体敷育后的固相支持物清洗至少三次。
所属类别：	发明专利