详情

原文传递一种检测蛋白纯度的方法

专利名称：	一种检测蛋白纯度的方法
摘要：	本发明提供了一种蛋白纯度的检测方法，采用体积排阻‑高效液相色谱法进行检测，以磷酸盐缓冲液为流动相可用于蛋白类生物制品中二聚体杂质的含量测定。本发明的蛋白纯度检测方法可以很好的将二聚体蛋白与单体蛋白分离开来，具有快速、简便、检测限低，灵敏度高等优点，适于产业应用。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	四川;51
申请人：	成都康弘生物科技有限公司
发明人：	柯潇;岳菊;郑强;雷刚;白灏
专利状态：	有效
申请日期：	2018-06-20T00:00:00+0800
发布日期：	2019-12-27T00:00:00+0800
申请号：	CN201810633150.4
公开号：	CN110618202A
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	610036 四川省成都市金牛区蜀西路36号
主权项：	1.一种检测蛋白纯度的方法，采用体积排阻-高效液相色谱法进行检测，所述检测方法的色谱条件中流动相为磷酸盐缓冲液；其中，所述磷酸盐缓冲液为包含150mM PB和100mMNaCl的水溶液。 2.根据权利要求1所述的检测蛋白纯度的方法，其特征在于，所述蛋白选自抗体或融合蛋白。 3.根据权利要求2所述的检测蛋白纯度的方法，其特征在于，所述抗体包含SEQ ID NO：2所示的轻链序列和SEQ ID NO：3所示的重链序列；所述融合蛋白包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。 4.根据权利要求1所述的检测蛋白纯度的方法，其特征在于，所述色谱条件中，流动相的pH为6.5-7.0，优选为7.0。 5.根据权利要求1所述的检测蛋白纯度的方法，其特征在于，所述色谱条件中，检测波长为220nm。 6.根据权利要求1所述的检测蛋白纯度的方法，其特征在于，所述色谱条件中，色谱柱为TSK-GEL G3000 SWXL型凝胶排阻色谱柱。 7.根据权利要求1所述的检测蛋白纯度的方法，其特征在于，所述色谱条件中，流动相流速为0.5mL/min。 8.根据权利要求1所述的检测蛋白纯度的方法，其特征在于，所述色谱条件中，柱温为20-30℃，优选25℃。 9.一种检测蛋白纯度的方法，包含以下步骤： 1)流动相配置：称取磷酸二氢钠适量溶解于超纯水中得磷酸二氢钠溶液，称取磷酸氢二钠适量溶解于超纯水中得磷酸氢二钠溶液；取适量磷酸二氢钠溶液和磷酸氢二钠溶液混匀，再加入NaCl，溶解后用酸碱调节剂调pH值至6.5-7.0，微孔滤膜过滤，即得；其中，所述酸碱调节剂选自氢氧化钠、盐酸； 2)供试品溶液配置：取待测蛋白样品适量，加入缓冲液，混匀，即得； 3)色谱检测：采用高效液相色谱法，凝胶体积排阻色谱柱，使用步骤1)中配置的流动相溶液，柱温25℃，流速为0.5ml/min，波长220nm，将步骤2)制备的供试品注入高效液相色谱仪，进行检测。
所属类别：	发明专利