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原文传递一种利用量子点敏化上转换纳米材料检测凝血酶的方法

专利名称：	一种利用量子点敏化上转换纳米材料检测凝血酶的方法
摘要：	本发明公开一种利用量子点敏化上转换纳米材料检测凝血酶的方法，包括以下步骤：（1）制备适配体TBA1修饰的上转换纳米粒子（UCNPs‑TBA1）；（2）制备适配体TBA2修饰的Ag2Se量子点（Ag2Se QDs‑TBA2）；（3）绘制凝血酶检测的标准曲线；（4）检测待测样品中的凝血酶浓度。本发明解决了利用FRET传感器检测的信背比低的问题，实现了待测样品中凝血酶的高灵敏检测，检出限可达0.091 nM。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	湖北大学
发明人：	刘志洪;余甜雨
专利状态：	有效
申请日期：	2019-09-23T00:00:00+0800
发布日期：	2019-12-27T00:00:00+0800
申请号：	CN201910897912.6
公开号：	CN110618118A
代理机构：	湖北武汉永嘉专利代理有限公司
代理人：	张秋燕
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	430062 湖北省武汉市武昌区友谊大道368号
主权项：	1.一种利用量子点敏化上转换纳米颗粒检测凝血酶的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）制备适配体TBA1修饰的上转换纳米粒子；（2）制备适配体TBA2修饰的Ag2Se量子点：将Ag2Se量子点与一端修饰有氨基的适配体TBA2反应，得到TBA2修饰的Ag2Se量子点；（3）绘制凝血酶检测的标准曲线：将步骤（1）所得上转换纳米粒子和步骤（2）所得的Ag2Se量子点加入到缓冲溶液中，并向其中加入不同量的凝血酶进行孵育，将孵育后的溶液用激光光源激发得到荧光强度，设定凝血酶的浓度为0时，所得空白样强度记为F0，以荧光比率F/F0为纵坐标，以凝血酶在缓冲溶液中的浓度为横坐标绘制标准曲线；（4）将待测样品用缓冲溶液进行稀释，在与步骤（3）相同的条件下测定荧光强度，进而根据步骤（3）所得标准曲线，获得待测样品中的凝血酶浓度。 2.根据权利要求1所述的一种利用量子点敏化上转换纳米颗粒检测凝血酶的方法，其特征在于所述的上转换纳米粒子的吸收光谱和Ag2Se量子点的发射光谱相重叠。 3.根据权利要求1所述的一种利用量子点敏化上转换纳米颗粒检测凝血酶的方法，其特征在于所述的上转换荧光纳米粒子的化学式为NaYF4:Yb,Er，形貌为球形，粒径为20-28nm；所述Ag2Se量子点的粒径为3-4 nm，形貌为球形，表面带有羧基。 4.根据权利要求1所述的一种利用量子点敏化上转换纳米颗粒检测凝血酶的方法，其特征在于所述的单链核酸TBA1和单链核酸TBA2的5’端都修饰有氨基，其序列分别为：5’-NH2-TTTTTAGTCCGTGGTAGGGCAGGTTGGGGTGACT-3’和5’-NH2-TTTTTGGTTGGTGTGGTTGG-3’。 5.根据权利要求1所述的一种利用量子点敏化上转换纳米颗粒检测凝血酶的方法，其特征在于步骤（2）中，Ag2Se量子点和TBA2反应时的比例为5 μmol：（0.5-3）nmol。 6.根据权利要求1所述的一种利用量子点敏化上转换纳米颗粒检测凝血酶的方法，其特征在于步骤（3）中，所述的缓冲溶液为HEPES缓冲溶液， pH为7.0-7.5。 7.根据权利要求1所述的一种利用量子点敏化上转换纳米颗粒检测凝血酶的方法，其特征在于步骤（3）中，缓冲溶液中凝血酶的加入量以其在缓冲溶液中的浓度计为0-125 nM。 8.根据权利要求1所述的一种利用量子点敏化上转换纳米颗粒检测凝血酶的方法，其特征在于步骤（3）中，步骤（2）所得的Ag2Se量子点的加入量以其在缓冲溶液中的浓度计为0.08-0.4 µM。 9.根据权利要求1所述的一种利用量子点敏化上转换纳米颗粒检测凝血酶的方法，其特征在于步骤（3）中，所述的孵育时间为2-5 h，孵育温度为37℃。 10.根据权利要求1所述的一种利用量子点敏化上转换纳米颗粒检测凝血酶的方法，其特征在于所述待测样品为血浆样品，需要先经过预处理将其中的凝血酶原转化为凝血酶原。
所属类别：	发明专利