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原文传递一种血必净注射液中多个小分子化学成分的检测方法

专利名称：	一种血必净注射液中多个小分子化学成分的检测方法
摘要：	本发明提供一种血必净注射液中多个小分子化学成分的检测方法，包括以下步骤：1)配制样品溶液；2)配制第一标准溶液；3)配制第二标准溶液；4)将样品溶液、第一标准溶液、第二标准溶液，采用高效液相色谱质谱联用法进行测定，通过标准曲线法对样品溶液中57种小分子化学成分进行定量，再半定量确定样品溶液中与定量确定的57种小分子化学成分结构相似的其它66种小分子化学成分的含量。本发明提供的一种血必净注射液中多个小分子化学成分的检测方法，可高通量、高灵敏度地定量或半定量检测123个中药小分子化合物，为进一步优化血必净的制备工艺、提高产品质量均一性提供关键的技术手段。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	中国科学院上海药物研究所
发明人：	程晨;李川;余玄;王亚亚;贺容容;董凯;张桂萍;姚小青
专利状态：	有效
申请日期：	2019-09-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-12-31T00:00:00+0800
申请号：	CN201910934055.2
公开号：	CN110632230A
代理机构：	上海光华专利事务所(普通合伙)
代理人：	许亦琳;余明伟
分类号：	G01N30/88(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	201203 上海市浦东新区祖冲之路555号
主权项：	1.一种血必净中多个小分子化学成分的检测方法，包括以下步骤： 1)将血必净注射液采用溶剂稀释后定容，配制样品溶液； 2)配制第一标准溶液，所述第一标准溶液为血必净注射液中红花黄酮类成分、赤芍单萜糖苷类成分、丹参儿茶酚类成分、第五类成分中至少一种成分标准品用溶剂稀释后定容的溶液； 3)配制第二标准溶液，所述第二标准溶液为血必净注射液中川芎和当归苯酞类成分中至少一种成分标准品用溶剂稀释后定容的溶液； 4)将样品溶液、第一标准溶液、第二标准溶液，采用高效液相色谱质谱联用法进行测定，通过质谱对样品溶液中123种小分子化学成分进行定性，通过标准曲线法对样品溶液中57种小分子化学成分进行定量，再半定量确定样品溶液中与定量确定的57种小分子化学成分结构相似的其它66种小分子化学成分的含量；所述红花黄酮类成分为36种，包括有羟基红花黄色素A、山奈酚、6-羟基山奈酚、山奈酚-3-O-葡萄糖苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷、山奈酚-3-O-槐糖苷、槲皮素、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-芸香糖苷、圣草酚、芹菜素、木犀草素、木犀草素-7-O-葡萄糖苷、野黄芩苷、红花黄色素A、Saffloquinoside A、Saffloquinoside C/D、Safflomin C、SaffloquinosideE、原红花苷、脱水红花黄色素B、红花黄色素B、山奈酚-3-O-葡萄糖-7-O-葡萄糖醛酸苷/6-羟基芹菜素-6-O-葡萄糖-7-O-葡萄糖醛酸苷、6-羟基山奈酚-7-O-葡萄糖苷、6-羟基山奈酚-3-O-葡萄糖苷、6-羟基山奈酚-3-O-芸香糖苷、6-羟基山奈酚-3,6-O-葡萄糖苷、6-羟基山奈酚-6,7-O-葡萄糖苷、6-羟基山奈酚-3-O-芸香糖-6-O-葡萄糖苷、6-羟基山奈酚-3,6,7-O-葡萄糖苷、6-羟基山奈酚-3,6-O-葡萄糖-7-O-葡萄糖醛酸苷、槲皮素-3-O-鼠李糖苷-7-O-葡萄糖醛酸、槲皮素-3,7-O-葡萄糖苷、新红花苷、6-羟基芹菜素、Safflochalconeside；所述赤芍单萜糖苷类成分为19种，包括有芍药内酯苷、芍药苷、氧化芍药苷、6'-O-没食子酰去苯甲酰-芍药苷、苯甲酰芍药苷、牡丹皮苷C、苯甲酰氧化芍药苷、牡丹皮苷J、没食子酰芍药苷、1-O-β-D-Glucopyranosyl-paeonisuffrone、去苯甲酰芍药苷、氧化芍药苷同分异构体1、氧化芍药苷同分异构体2、氧化芍药苷同分异构体3、牡丹皮苷D、牡丹皮苷E、牡丹皮苷B、没食子酰芍药苷同分异构体、没食子酰氧化芍药苷；所述丹参儿茶酚类成分为19种，包括有原儿茶醛、原儿茶酸、丹参素、迷迭香酸、丹酚酸D、丹酚酸C、丹酚酸A、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸F、丹酚酸G、原紫草酸、丹参酸C、丹参酸C同分异构体、异丹酚酸C、异迷迭香酸苷、丹酚酸E、4-甲氧基丹酚酸B、咖啡酸；所述川芎和当归苯酞类成分为21种，包括有Z-丁烯基苯酞、正丁基苯酞、Z-藁本内酯、洋川芎内酯A、3-羟基-正丁基苯酞、洋川芎内酯G、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯N、开环洋川芎内酯I、欧当归内酯A、E-丁烯基苯酞、E-藁本内酯、蛇床内酯、Z-6,7-环氧藁本内酯、4-羟基-3-丁基苯酞、6,7-双羟基藁本内酯、洋川芎内酯J、欧当归内酯A同分异构体、洋川芎内酯P同分异构体1、洋川芎内酯P同分异构体2；所述第五类成分为28种，包括有对香豆酸、对羟基苯甲酸、阿魏酸、绿原酸、苯甲酸、没食子酸、没食子酰甲酯、儿茶素、香草酸、新绿原酸、1,5-二咖啡酰奎宁酸、异绿原酸B、异绿原酸C、N-p-coumaroylserotonin-O-glucopyranoside、4-O-葡萄糖氧基苯甲酸、Safflospermidine A、Safflospermidine B、N1,N5,N10-(Z)-tri-p-coumaroylspermidine、N1,N5,N10-(E)-tri-p-coumaroylspermidine、1'-O-苯甲酰蔗糖、1'-O-没食子酰蔗糖、6-O-没食子酰蔗糖、三没食子酰葡萄糖、四没食子酰葡萄糖、四没食子酰葡萄糖同分异构体、五没食子酰葡萄糖、芍药二酮、30-降常春藤皂苷元。 2.根据权利要求1所述的一种血必净中多个小分子化学成分的检测方法，其特征在于，步骤1)、2)或3)中，所述溶剂为10-75v/v％的甲醇水溶液。 3.根据权利要求1所述的一种血必净中多个小分子化学成分的检测方法，其特征在于，步骤1)中，所述血必净注射液与溶剂的体积比为1:1-1:5000。 4.根据权利要求1所述的一种血必净中多个小分子化学成分的检测方法，其特征在于，步骤2)中，所述第一标准溶液中有红花黄酮类成分、赤芍单萜糖苷类成分、丹参儿茶酚类成分、第五类成分共46种，包括有以下小分子化学成分：所述红花黄酮类成分为14种，包括有羟基红花黄色素A、山奈酚、6-羟基山奈酚、山奈酚-3-O-葡萄糖苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷、山奈酚-3-O-槐糖苷、槲皮素、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-芸香糖苷、圣草酚、芹菜素、木犀草素、木犀草素-7-O-葡萄糖苷、野黄芩苷；所述赤芍单萜糖苷类成分为9种，包括有芍药内酯苷、芍药苷、氧化芍药苷、6'-O-没食子酰去苯甲酰芍药苷、苯甲酰芍药苷、牡丹皮苷C、苯甲酰氧化芍药苷、牡丹皮苷J、没食子酰芍药苷；所述丹参儿茶酚类成分为10种，包括有原儿茶醛、原儿茶酸、咖啡酸、丹参素、迷迭香酸、丹酚酸D、丹酚酸C、丹酚酸A、紫草酸、丹酚酸B；所述第五类成分为13种，包括有对香豆酸、对羟基苯甲酸、阿魏酸、绿原酸、苯甲酸、没食子酸、没食子酰甲酯、儿茶素、香草酸、新绿原酸、1,5-二咖啡酰奎宁酸、异绿原酸B、异绿原酸C。 5.根据权利要求1所述的一种血必净中多个小分子化学成分的检测方法，其特征在于，步骤3)中，所述第二标准溶液中有川芎和当归苯酞类成分，共11种，包括有Z-丁烯基苯酞、正丁基苯酞、Z-藁本内酯、洋川芎内酯A、3-羟基-正丁基苯酞、洋川芎内酯G、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯N、开环洋川芎内酯I、欧当归内酯A。 6.根据权利要求1所述的一种血必净中多个小分子化学成分的检测方法，其特征在于，步骤4)中，所述样品溶液及第一标准溶液采用的高效液相色谱质谱联用法中，所述高效液相色谱测定条件为：色谱柱：T3柱；柱温：40-50℃；流速：0.2-0.4ml/min；进样量：3-10μl；流动相：水-甲醇溶液，含甲酸；其中，A相为水，含1-30mM甲酸；B相为甲醇，含1-30mM甲酸；分析时间：20min；梯度洗脱。 7.根据权利要求6所述的一种血必净中多个小分子化学成分的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序的具体为：0-1min，A相：B相体积比为95：5-95：5；1-15min，A相：B相体积比为95：5-20：80；15-17min，A相：B相体积比为20：80-5：95；17-20min，A相：B相体积比为5：95-95：5。 8.根据权利要求1所述的一种血必净中多个小分子化学成分的检测方法，其特征在于，步骤4)中，所述样品溶液及第二标准溶液采用的高效液相色谱质谱联用法中，所述高效液相色谱测定条件为：色谱柱：T3柱；柱温：40-50℃；流速：0.2-0.4ml/min；进样量：3-10μl；流动相：水-甲醇溶液，含甲酸；其中，A相为水，含0.5-1.5mM甲酸；B相为甲醇，含0.5-1.5mM甲酸；分析时间：20min；梯度洗脱。 9.根据权利要求8所述的一种血必净中多个小分子化学成分的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序的具体为：0-15min，A相：B相体积比为95：5-5：95；15-17min，A相：B相体积比为5：95-5：95；17-20min，A相：B相体积比为5：95-95：5。 10.根据权利要求1所述的一种血必净中多个小分子化学成分的检测方法，其特征在于，步骤4)中，所述样品溶液、第一标准溶液、第二标准溶液采用的高效液相色谱质谱联用法中，所述质谱测定条件为：离子源为ESI源；检测模式为负离子电喷雾电离模式ESI-和正离子电喷雾电离模式ESI+；扫描模式为Sensitivity模式；扫描范围为m/z 50–1000，扫描时间为0.3s；数据采集模式为MSE；毛细管电压为在ESI-模式-2.5kv或在ESI+模式3.0kv；离子源温度为120℃；锥孔气体流量为50L/hr；去溶剂化气体流量为800L/hr；去溶剂化温度为400℃；ESI-：红花黄酮类成分、赤芍单萜糖苷类成分、丹参儿茶酚类成分和第五类成分，锥孔电压为35V；ESI+：川芎和当归苯酞类成分，锥孔电压为40V；提取锥孔电压为4V；质量数校正范围为m/z 50-1000；校正溶液为5mM甲酸钠溶液，流速10μL/min；实时校正Lock Spray为亮氨酸脑啡肽溶液，流速5μL/min，ESI-模式校正质量数m/z 554.2615和ESI+模式校正质量数m/z 556.2771；数据类型为centroid；打碎能量ramp为20-50eV，红花黄酮类成分、赤芍单萜糖苷类成分、丹参儿茶酚类成分和第五类成分；打碎能量ramp为20-40eV，川芎和当归苯酞类成分。
所属类别：	发明专利