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原文传递一种血必净注射液苯酞内酯类成分含量测定方法

专利名称：	一种血必净注射液苯酞内酯类成分含量测定方法
摘要：	本发明属于医药技术领域，具体涉及一种一种血必净注射液苯酞内酯类成分含量测定方法，用于测定血必净注射液中阿魏酸、洋川芎内酯I和洋川芎内酯H含量，试验证明，该方法简单，精密度，准确度，重现性及耐用性良好，仅需以阿魏酸为对照品，通过组分间的相对校正因子，便可完成三种成分的含量检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	天津;12
申请人：	天津红日药业股份有限公司
发明人：	曹菁;薛莎;张桂萍;董凯;胡小峰;刘婷;张婉玉;张建辉;李玉坤
专利状态：	有效
申请日期：	2019-02-22T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-03T00:00:00+0800
申请号：	CN201910135461.2
公开号：	CN109709244A
代理机构：	北京华科联合专利事务所(普通合伙)
代理人：	王为;孟旭
分类号：	G01N30/06(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	301700 天津市武清区天津新技术产业园区武清开发区泉发路西
主权项：	1.一种血必净注射液中苯酞内酯类成分的含量测定方法，包括以下步骤： (1)以阿魏酸为内参物的相对校正因子测定：选用斜率法或者多点校正法，以阿魏酸为内参物计算得到相对因子； (2)采用一测多评法测定供试品中阿魏酸、洋川芎内酯I和洋川芎内酯H的含量： a、供试品溶液：取血必净注射液配制成供试品溶液； b、对照品溶液：以阿魏酸为对照品，配制成为对照品溶液； c、测定方法：量取供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按一测多评法计算阿魏酸、洋川芎内酯I和洋川芎内酯H的含量；其中，色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为三氟乙酸乙腈；流动相B为三氟乙酸水；进行洗脱梯度。 2.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为0.01％三氟乙酸乙腈；流动相B为0.01％三氟乙酸水；洗脱梯度：时间(min) 0 10 15 25 28 29 33 A相(％) 8 17 20 30 100 10 8 B相(％) 92 83 80 70 0 90 92 。 3.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，色谱条件：色谱柱Waters Acquity UPLC BEH C18，型号为1.7μm,2.1×100mm，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为0.01％三氟乙酸乙腈；流动相B为0.01％三氟乙酸水；洗脱梯度：时间(min) 0 10 15 25 28 29 33 A相(％) 8 17 20 30 100 10 8 B相(％) 92 83 80 70 0 90 92 柱温：33℃-37℃；流速：0.35mL/min-0.45mL/min；进样量：1μL；检测波长：280nm。 4.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，其中，(1)以阿魏酸为内参物的相对校正因子测定方法1、斜率法：量取不同浓度相同体积的对照品溶液注入超高效液相色谱仪，记录色谱图，分别绘制阿魏酸、洋川芎内酯I和洋川芎内酯H的标准曲线；计算相对校正因子：斜率法计算公式：其中：f为相对校正因子，a为斜率，i为某待测成分，s为内参物。 5.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，其中，(1)以阿魏酸为内参物的相对校正因子测定方法2、多点校正法：量取不同体积相同浓度的对照品溶液，注入超高效液相色谱仪，记录色谱图，计算峰面积与浓度比值；计算相对校正因子：多点校正计算公式：其中：f为相对校正因子，As为内参物峰面积，Cs为内参物浓度，Ai为某待测成分面积，Ci为某待测成分浓度。 6.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，所述一测多评法测定供试品中阿魏酸、洋川芎内酯I和洋川芎内酯H的含量，步骤如下： a、供试品溶液：取血必净注射液配制成供试品溶液； b、对照品溶液：以阿魏酸为对照品，配制成为对照品溶液； c、测定方法：量取供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按一测多评法计算阿魏酸、洋川芎内酯I和洋川芎内酯H的含量，计算方法：其中：Ci为供试品中待测成分i的浓度，fsi为内参物s对待测成分i的校正因子，Cs为供试品中内参物s的浓度，Ai为供试品中待测成分i的峰面积，As为供试品中内参物s的峰面积。 7.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)以阿魏酸为内参物的相对校正因子测定 a、测定方法1(斜率法)：量取不同浓度相同体积的对照品溶液注入超高效液相色谱仪，记录色谱图，分别绘制阿魏酸、洋川芎内酯I和洋川芎内酯H的标准曲线； b、测定方法2(多点校正法)：量取不同体积相同浓度的对照品溶液，注入超高效液相色谱仪，记录色谱图，计算峰面积与浓度比值；其中色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为0.01％三氟乙酸乙腈；流动相B为0.01％三氟乙酸水；洗脱梯度：时间(min) 0 10 15 25 28 29 33 A相(％) 8 17 20 30 100 10 8 B相(％) 92 83 80 70 0 90 92 柱温：33℃-37℃；流速：0.35mL/min-0.45mL/min；检测波长：280nm， c、相对校正因子计算：斜率法计算公式：其中：f为相对校正因子，a为斜率，i为某待测成分，s为内参物，多点校正计算公式：其中：f为相对校正因子，As为内参物峰面积，Cs为内参物浓度，Ai为某待测成分面积，Ci为某待测成分浓度， (2)一测多评法(校正因子法)测定供试品中阿魏酸、洋川芎内酯I和洋川芎内酯H的含量 a、供试品溶液：取血必净注射液配制成供试品溶液； b、对照品溶液：以阿魏酸为对照品，配制成为对照品溶液； c、测定方法：量取供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按一测多评法计算阿魏酸、洋川芎内酯I和洋川芎内酯H的含量其中色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为0.01％三氟乙酸乙腈；流动相B为0.01％三氟乙酸水；洗脱梯度：时间(min) 0 10 15 25 28 29 33 A相(％) 8 17 20 30 100 10 8 B相(％) 92 83 80 70 0 90 92 柱温：33℃-37℃；优选柱温：35℃；流速：0.35mL/min-0.45mL/min；优选流速为0.4mL/min；进样量：1μL；检测波长：280nm， d、计算方法：其中：Ci为供试品中待测成分i的浓度，fsi为内参物s对待测成分i的校正因子，Cs为供试品中内参物s的浓度，Ai为供试品中待测成分i的峰面积，As为供试品中内参物s的峰面积。 8.根据权利要求7所述的含量测定方法，其特征在于， (1)以阿魏酸为内参物的相对校正因子测定 a、测定方法1(斜率法)：阿魏酸标准曲线：精密称定阿魏酸15mg置100mL的量瓶中，加20％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得阿魏酸储备液，精密量取阿魏酸对照品储备液1、2、3、4、6、8mL分别置于50mL的量瓶中，加20％甲醇稀释至刻度，摇匀，制得6μg/mL、12μg/mL、18μg/mL、24μg/mL、36μg/mL、48μg/mL共6个不同浓度的标准曲线溶液；洋川芎内酯I标准曲线：精密称定洋川芎内酯I 30mg置100mL的量瓶中，加20％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得洋川芎内酯I储备液，精密量取洋川芎内酯I对照品储备液1、3、4、5、6mL分别置于50mL的量瓶中，加20％甲醇稀释至刻度，摇匀，制得8μg/mL、24μg/mL、32μg/mL、40μg/mL、48μg/mL共5个不同浓度的标准曲线溶液；洋川芎内酯H标准曲线：精密称定洋川芎内酯H 12mg置100mL的量瓶中，加20％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得洋川芎内酯H储备液，精密量取洋川芎内酯I对照品储备液0.5、1、2、3、4、5mL分别置于50mL的量瓶中，加20％甲醇稀释至刻度，摇匀，制得1.2μg/mL、2.4μg/mL、4.8μg/mL、7.2μg/mL、9.6、12μg/mL共6个不同浓度的标准曲线溶液；量取不同浓度的标准曲线溶液20μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，分别绘制阿魏酸、洋川芎内酯I和洋川芎内酯H的标准曲线。 9.根据权利要求7所述的含量测定方法，其特征在于， (1)以阿魏酸为内参物的相对校正因子测定 b、测定方法2(多点校正法)：阿魏酸储备液：精密称定阿魏酸15mg置100mL的量瓶中，加20％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；洋川芎内酯I储备液：精密称定洋川芎内酯I 30mg置100mL的量瓶中，加20％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；洋川芎内酯H储备液：精密称定洋川芎内酯H 12mg置100mL的量瓶中，加20％甲醇稀释至刻度，摇匀，后精密量取10mL置25mL容量瓶中，加20％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；混合对照品溶液：精密量取阿魏酸储备液3mL、洋川芎内酯I储备液4mL、洋川芎内酯H储备液2mL置50mL量瓶中，加20％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得，量取混合对照品溶液0.5、0.8、1.0、1.2、1.5μL注入高效液相色谱仪，记录各色谱峰峰面积， c、校正因子计算：斜率法计算公式：其中：f为相对校正因子，a为斜率，i为某待测成分，s为内参物，多点校正计算公式：其中：f为相对校正因子，As为内参物峰面积，Cs为内参物浓度，Ai为某待测成分面积，Ci为某待测成分浓度。 10.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：由流动相A和流动相B组成；流动相A为0.01％三氟乙酸乙腈；流动相B为0.01％三氟乙酸水；洗脱梯度：时间(min) 0 10 15 25 28 29 33 A相(％) 8 17 20 30 100 10 8 B相(％) 92 83 80 70 0 90 92 柱温：35℃；流速：0.4mL/min；检测波长：280nm， (2)以阿魏酸为内参物的相对校正因子的测定 a、测定方法1(斜率法)：阿魏酸标准曲线：精密称定阿魏酸15mg置100mL的量瓶中，加20％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得阿魏酸储备液，精密量取阿魏酸对照品储备液1、2、3、4、6、8mL分别置于50mL的量瓶中，加20％甲醇稀释至刻度，摇匀，制得6μg/mL、12μg/mL、18μg/mL、24μg/mL、36μg/mL、48μg/mL共6个不同浓度的标准曲线溶液；洋川芎内酯I标准曲线：精密称定洋川芎内酯I 30mg置100mL的量瓶中，加20％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得洋川芎内酯I储备液，精密量取洋川芎内酯I对照品储备液1、3、4、5、6mL分别置于50mL的量瓶中，加20％甲醇稀释至刻度，摇匀，制得8μg/mL、24μg/mL、32μg/mL、40μg/mL、48μg/mL共5个不同浓度的标准曲线溶液；洋川芎内酯H标准曲线：精密称定洋川芎内酯H 12mg置100mL的量瓶中，加20％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得洋川芎内酯H储备液，精密量取洋川芎内酯I对照品储备液0.5、1、2、3、4、5mL分别置于50mL的量瓶中，加20％甲醇稀释至刻度，摇匀，制得1.2μg/mL、2.4μg/mL、4.8μg/mL、7.2μg/mL、9.6、12μg/mL共6个不同浓度的标准曲线溶液；量取不同浓度的标准曲线溶液20μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，分别绘制阿魏酸、洋川芎内酯I和洋川芎内酯H的标准曲线， b、测定方法2(多点校正法)：阿魏酸储备液：精密称定阿魏酸15mg置100mL的量瓶中，加20％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；洋川芎内酯I储备液：精密称定洋川芎内酯I 30mg置100mL的量瓶中，加20％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；洋川芎内酯H储备液：精密称定洋川芎内酯H 12mg置100mL的量瓶中，加20％甲醇稀释至刻度，摇匀，后精密量取10mL置25mL容量瓶中，加20％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；混合对照品溶液：精密量取阿魏酸储备液3mL、洋川芎内酯I储备液4mL、洋川芎内酯H储备液2mL置50mL量瓶中，加20％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得，量取混合对照品溶液0.5、0.8、1.0、1.2、1.5μL注入高效液相色谱仪，记录各色谱峰峰面积， c、校正因子计算：斜率法计算公式：其中：f为相对校正因子，a为斜率，i为某待测成分，s为内参物，多点校正计算公式：其中：f为相对校正因子，As为内参物峰面积，Cs为内参物浓度，Ai为某待测成分面积，Ci为某待测成分浓度， (3)一测多评法测定供试品中阿魏酸、洋川芎内酯I和洋川芎内酯H的含量供试品溶液：精密量取血必净注射液5mL置10mL的容量瓶中，加注射用水稀释至刻度，摇匀，即得；对照溶液：精密称定阿魏酸15mg置50mL量瓶中加20％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得阿魏酸对照品溶液；测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1.0μL，注入超高液相色谱仪，按步骤(1)给定色谱条件测定，记录色谱图，根据步骤(2)中确定的校正因子，按照下述公式计算阿魏酸、洋川芎内酯I和洋川芎内酯H的含量，其中：Ci为供试品中待测成分i的浓度，fsi为内参物s对待测成分i的校正因子，Cs为供试品中内参物s的浓度，Ai为供试品中待测成分i的峰面积，As为供试品中内参物s的峰面积。
所属类别：	发明专利