详情

原文传递一种MHC I结合多肽基序的鉴定方法

专利名称：	一种MHC I结合多肽基序的鉴定方法
摘要：	本发明提供了一种MHC I结合多肽基序的鉴定方法，包括以下步骤：（1）合成序列随机的长度为8‑12的随机多肽；（2）将随机多肽进行De Novo分析，获得氨基酸分布；（3）对MHC I的α链和β2m链进行表达；（4）将随机多肽、α链和β2m链在溶液中形成MHC I‑多肽复合物；（5）将MHC I‑多肽复合物热变性，分离纯化得到MHC I结合肽；（6）将MHC I结合多肽进行De Novo分析，获得MHC I结合多肽氨基酸分布，通过与步骤（2）中氨基酸分布比较，得到相应MHC I结合多肽不同位点氨基酸的偏好性及主要锚定位。本发明的方法，操作简单、结果可靠、耗时短，实现了对潜在病原特异性T细胞表位的高效筛选，可广泛应用于动物或人体多肽疫苗的前期筛选。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	中国农业大学
发明人：	张念之;张琳;吴家强;魏孝辉;李卓琳
专利状态：	有效
申请日期：	2018-12-11T00:00:00+0800
发布日期：	2019-04-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201811508443.6
公开号：	CN109669043A
代理机构：	济南泉城专利商标事务所
代理人：	李桂存
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100083 北京市海淀区圆明园西路2号
主权项：	1.一种MHC I结合多肽基序的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）利用除半胱氨酸外的19种氨基酸合成序列随机的长度为8-12的随机多肽，构成随机多肽库；（2）将随机肽进行De Novo分析，获得氨基酸分布；（3）对MHC I的重链和轻链进行表达；（4）将随机多肽、重链和轻链在溶液中形成MHC I-多肽复合物并浓缩、分离纯化；（5）将MHC I-多肽复合物热变性，分离纯化得到MHC I结合多肽；（6）将MHC I结合多肽进行De Novo分析，获得MHC I结合多肽氨基酸分布，通过与步骤（2）中氨基酸分布比较，得到相应MHC I结合多肽不同位点氨基酸的偏好性及主要锚定位。 2.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，步骤(1)中，随机多肽长度优选为9-10。 3.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，步骤(4)中，所述重链、轻链和随机多肽的摩尔比为1:1:3-7；优选为1:1:5。 4.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，步骤(6)中，比较的为De Novo分析50分以上的多肽。 5.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，步骤(6)中，对主要锚定位的位点及其氨基酸偏好性判断方法如下：通过De Novo分析，采用Weblogo和/或icelogo作图直接进行判断：结合的氨基酸种类多的位点为主要锚定位点，亲和力强的氨基酸即偏好氨基酸。 6.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，步骤(6)中，主要锚定位数量为1-6个；优选为1-3个；更优选为1-2个。 7.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，步骤(4)中，所述溶液含有100mMTris，400mM L-精氨酸，2mM EDTA，1.5306g/L还原型谷胱甘肽和0.3064g/L谷胱甘肽，pH8.0。 8.一种如权利要求1-7任一所述MHC I结合多肽基序的鉴定方法在制备MHC I稳定结合多肽中的应用，其特征在于，包括以下步骤：根据MHC I结合多肽主要锚定位的氨基酸的偏好性合成长度为8-12的多肽，即相应的MHC I稳定结合多肽。 9.一种含有如权利要求8所述的应用制备的MHC I稳定结合多肽和表位抗原疫苗。 10.根据权利要求9所述的表位抗原疫苗，其特征在于，还包括免疫佐剂，如壳聚糖、载体蛋白。
所属类别：	发明专利