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原文传递一种检测口蹄疫病毒O型保护性抗体的试剂盒和检测方法

专利名称：	一种检测口蹄疫病毒O型保护性抗体的试剂盒和检测方法
摘要：	本发明提供了一种检测口蹄疫病毒O型保护性抗体的试剂盒和检测方法，属于免疫学技术领域，所述试剂盒包括以下组分：捕获抗体；检测抗体；生物素；FMDV O型146S抗原；Strep‑HRP；TMB底物；包被缓冲液和封闭液；所述捕获抗体和检测抗体为口蹄疫病毒O型牛源广谱中和抗体。本发明提供的检测试剂盒和方法结合了病毒中和试验和液湘阻断ELISA两种方法的优点，检测方法操作简单，检测结果可靠精确。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	甘肃;62
申请人：	中国农业科学院兰州兽医研究所
发明人：	曹轶梅;李平花;白兴文;张婧;马雪青;李冬;李坤;卢曾军;刘在新;王省;付元芳;周莎莎;包惠芳;孙普
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-05T00:00:00+0800
发布日期：	2019-04-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201910163194.X
公开号：	CN109682980A
代理机构：	北京高沃律师事务所
代理人：	刘奇
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	730000 甘肃省兰州市城关区盐场堡徐家坪1号
主权项：	1.一种检测血清中口蹄疫病毒O型保护性抗体的试剂盒，其特征在于，包括以下组分：捕获抗体；检测抗体；生物素；FMDV O型146S抗原；Strep-HRP；TMB底物；包被缓冲液和封闭液；所述捕获抗体和检测抗体为口蹄疫病毒O型牛源广谱中和抗体。 2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述捕获抗体和检测抗体对FMDV O/Mya/98(SEA)、FMDV O/ZK/93(Cathay)和FMDV O/HK/99(ME-SA)的中和效价＞128；液相阻断ELISA效价＜4。 3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述包被缓冲液为碳酸盐缓冲液。 4.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述封闭液为包括0.8～1.2wt％牛血清白蛋白和4.5～5.5wt％蔗糖的PBS溶液。 5.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阴性对照血清和阳性对照血清。 6.利用权利要求1～5任意一项所述的试剂盒检测血清中口蹄疫病毒O型保护性抗体效价的方法，包括以下步骤： 1)用包被液稀释所述捕获抗体后，进行包被获得包被后的捕获抗体； 2)将所述FMDV O型146S抗原和待检血清结合后与步骤1)中所述包被后的捕获抗体反应获得第一反应复合物； 3)将生物素标记的检测抗体与步骤2)中所述的第一反应复合物进行反应获得第二反应混合物； 4)向所述第二反应混合物中依次添加Strep-HRP和TMB底物后，终止反应，测定反应液的OD450值；若反应液的OD450值大于阻断50％反应的对照OD450值，则待检血清为口蹄疫病毒O型保护性抗体阴性；若反应液的OD450值小于阻断50％反应的对照OD450值，则待检血清为口蹄疫病毒O型保护性抗体阳性。 7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述捕获抗体的包被浓度为1.8～2.2μg/mL；所述生物素标记的检测抗体的使用浓度为0.8～1.2μg/mL。 8.根据权利要求6或7所述的检测方法，其特征在于，所述FMDV O型146S抗原的使用浓度为0.8～1.2μg/mL。 9.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述待检血清包括不同比例梯度稀释后的待检血清样品，以呈阳性的待检血清样品的最高稀释倍数作为所述待检血清中抗体的效价。 10.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述阻断50％反应的对照OD450值为对照OD450值的平均数的1/2。
所属类别：	发明专利