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原文传递一种治疗性抗体的放行检测方法

专利名称：	一种治疗性抗体的放行检测方法
摘要：	本发明公开了一种可用于抗体类药物放行的基于电化学发光技术的生物学活性方法，其特征在于，该方法利用电化学发光法能检测供试品抗体的生物学活性(细胞结合方法)，通过对所述供试品抗体浓度和电化学发光强度进行四参数拟合，计算生物学活性。该方法通过方法学确认，能用于其中抗体类药物的放行检测。抗体类药物和供试品抗体包括抗PD‑1抗体或抗PD‑L1抗体。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海药明生物技术有限公司
发明人：	贾晓青;陈敏;黄岗;周伟昌;陈智胜
专利状态：	有效
申请日期：	2017-10-24T00:00:00+0800
发布日期：	2019-04-30T00:00:00+0800
申请号：	CN201711004653.7
公开号：	CN109696461A
代理机构：	北京奉思知识产权代理有限公司
代理人：	吴立;邹轶鲛
分类号：	G01N27/26(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	200131 上海市浦东新区中国(上海)自由贸易试验区华京路2号7层701室
主权项：	1.一种用于抗体生物学活性放行方法，其特征在于，所述方法利用电化学发光法检测供试品抗体的细胞结合活性，通过对所述供试品抗体浓度和电化学发光强度进行四参数拟合，计算生物学活性，该方法通过方法学确认能用于抗体的生物学活性放行检测。 2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗体包括抗体类药物。 3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述供试品抗体包括抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体。 4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述抗PD-1抗体的生物学活性放行方法的步骤包括： a)将细胞表面表达PD-1的细胞铺于细胞板中，之后不需要洗涤； b)加入PD-L1重组蛋白、检测抗体、和所述抗PD-1抗体，孵育，之后不需要洗涤； c)加入无表面活性剂的读数缓冲液； d)使用设备读板，得到电化学发光强度。 5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述抗PD-L1抗体的生物学活性放行方法的步骤包括： a)将细胞表面表达PD-L1的细胞铺于细胞板中，之后不需要洗涤； b)加入PD-1重组蛋白、检测抗体、和所述抗PD-L1抗体，孵育，之后不需要洗涤； c)加入无表面活性剂的读数缓冲液； d)使用设备读板，得到电化学发光强度。 6.一种利用电化学发光技术检测抗PD-1抗体的细胞活性的方法，其特征在于，所述方法的步骤包括： a)将细胞表面表达PD-1的细胞铺于细胞板中，之后不需要洗涤； b)加入PD-L1重组蛋白、检测抗体、和所述抗PD-1抗体，孵育，之后不需要用洗涤； c)加入无表面活性剂的读数缓冲液； d)使用设备读板，得到电化学发光强度。 7.一种利用电化学发光技术检测抗PD-L1抗体的细胞活性方法，其特征在于，所述方法的步骤包括： a)将细胞表面表达PD-L1的细胞铺于细胞板中，之后不需要液洗涤； b)加入PD-1重组蛋白、检测抗体、和所述PD-L1单克隆抗体，孵育，之后不需要洗涤； c)加入无表面活性剂的读数缓冲液； d)使用设备读板，得到电化学发光强度。 8.如权利要求4至7任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤还可以包括： a')在步骤a)之前，在细胞板中加入封闭液，孵育约1至3小时，之后用缓冲液洗涤细胞板。 9.如权利要求1至7任一项所述的方法，其特征在于，对所述供试品抗体浓度和电化学发光强度利用公式(1)进行四参数拟合，根据参考品、质控品及供试品四参数拟合计算得到C值，即IC50值，利用公式(2)计算得到供试品相对活性：其中，x表示自变量，A表示左平台，B表示曲率参数，C表示半数抑制量，所述半数抑制量的单位为ng/mL，D表示右平台。 10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，系统适应性标准为以下标准中的一个以上： a)A参数/D参数≥2； b)平行性分析：曲线的斜率比在0.7至1.4之间；高平台比在0.8至1.25之间； c)所有线性段的复孔CV≤30％； d)所述质控品的生物学活性在75％至125％之间； e)四参数拟合S型曲线的R2≥0.95。 11.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述封闭液为含体积浓度为1％至5％的牛血清白蛋白的缓冲液或10％至30％胎牛血清的缓冲液，优选为15％至30％胎牛血清的缓冲液或含体积浓度为1％至3％牛血清白蛋白的缓冲液。 12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述缓冲液为PBS缓冲液或基础培养基。 13.如权利要求4至7任一项所述的方法，其特征在于，所述细胞板为96孔板，优选为MSD高结合的96孔板。 14.如权利要求4至7任一项所述的方法，其特征在于，所述细胞为表达PD-1或PD-L1的CHO细胞。 15.如权利要求4至7任一项所述的方法，其特征在于，细胞板中的细胞密度为2.5E4/孔至20E4/孔，优选为3.5E4/孔至7.5E4/孔，更优选为3.5E4/孔至5E4/孔。 16.如权利要求4至7任一项所述的方法，其特征在于，所述PD-1重组蛋白或PD-L1重组蛋白的浓度为50ng/mL至200ng/mL，优选为80ng/mL至160ng/mL。 17.如权利要求4至7任一项所述的方法，其特征在于，所述检测抗体的浓度为500ng/mL至1000ng/mL，优选为1000ng/mL。 18.如权利要求4至7任一项所述的方法，其特征在于，步骤b)中的孵育时间为60分钟至90分钟，优选为90分钟。 19.如权利要求4至7任一项所述的方法，其特征在于，所述重组蛋白为融合了标签的蛋白质，其中所述标签优选为鼠源Fc。 20.如权利要求4至7任一项所述的方法，其特征在于，所述检测抗体为钌结合的抗小鼠IgG。
所属类别：	发明专利