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原文传递一种中药组合物的检测方法及其应用

专利名称：	一种中药组合物的检测方法及其应用
摘要：	本发明提供了一种中药组合物的检测方法，该中药组合物包括如下重量份的原料药组成：人参4‑9份、炒酸枣仁4‑9份、炙淫羊藿4‑9份、熟地黄5‑12份、麸炒白术3‑8份、制远志3‑8份、石菖蒲4‑9份、当归5‑12份、炙甘草1‑5份，所述检测方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以纯水为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱，检测波长：198‑208nm；检测人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量测定，此外，还利用HPLC法测定组合物中有效成分β‑细辛醚淫羊藿苷的含量、鉴定当归，利用TLC法对处方中的熟地黄、炙甘草实现定性鉴别，本发明所述方法准确度、灵敏度高，检测范围广，实现了对药品质量的有效控制，可作为所述中药组合物和制剂的质量监控方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京中研同仁堂医药研发有限公司
发明人：	李萍;肖婷婷;杨华;张蓓;高雯;候譞
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-03T00:00:00+0800
申请号：	CN201910088115.3
公开号：	CN109709240A
代理机构：	北京三聚阳光知识产权代理有限公司
代理人：	李敏
分类号：	G01N30/06(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	100079 北京市丰台区南三环中路20号
主权项：	1.一种中药组合物的检测方法，其特征在于，所述中药组合物包括如下重量份的原料药组成：人参4-9份、炒酸枣仁4-9份、炙淫羊藿4-9份、熟地黄5-12份、麸炒白术3-8份、制远志3-8份、石菖蒲4-9份、当归5-12份、炙甘草1-5份；所述中药组合物的检测方法包括如下人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量测定步骤： A、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量测定供试品溶液的制备：取所述中药组合物，依次经碱液提取、饱和正丁醇萃取、有机酸中和、蒸干和有机试剂溶解，得供试品溶液；对照品溶液的制备：取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品，加入有机溶剂制成对照品溶液；色谱条件：照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以纯水为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱，检测波长：198-208nm；测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定并计算。 2.根据权利要求1所述的中药组合物的检测方法，其特征在于，在所述人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量测定中，所述梯度洗脱程序具体为：0-35min，流动相A：流动相B的体积比为82％：18％；35-60min，流动相A：流动相B的体积比为82％：18％→76％：24％；60-61min，流动相A：流动相B的体积比为76％：24％→5％：95％；61-65min，流动相A：流动相B的体积比为5％：95％；65-66min，流动相A：流动相B的体积比为5％：95％→82％：18％；66-75min，流动相A：流动相B的体积比为82％：18％。 3.根据权利要求1或2所述的中药组合物的检测方法，其特征在于，在所述人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量测定中，所述碱液为NaOH溶液、KOH溶液、Ca(OH)2溶液、氨水、碳酸钠溶液和碳酸钾溶液中的一种或几种的混合溶液；所述碱液的质量浓度为3-20％；所述有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、氯仿和石油醚中的一种；所述有机酸为甲酸、乙酸和丙酸中的一种，所述有机酸的体积浓度为0.3％-0.5％。 4.根据权利要求1-3中任一所述的中药组合物的检测方法，其特征在于，在所述人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量测定中，所述供试品溶液制备的具体步骤为：取所述中药组合物0.5-2g，研细，称定重量，加入正丁醇饱和的3-8wt％NaOH水溶液8-12ml，60-90℃下水浴加热5-10min，加入40-60ml饱和正丁醇，振荡，超声，冷却，离心，取上清液加入0.3-0.5vt％乙酸水溶液1-3ml，70-90℃下水浴蒸干，冷却，残渣加入5-20vt％甲醇溶液溶解，稀释定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 5.根据权利要求1-4中任一所述的中药组合物的检测方法，其特征在于，还包括如下述β-细辛醚的含量测定和当归的鉴别、淫羊藿苷的含量测定、熟地黄鉴别和甘草鉴别中的至少一种： B、β-细辛醚的含量测定和当归的鉴别供试品溶液的制备：取所述中药组合物，加入有机溶剂提取，得供试品溶液；对照品溶液的制备：取β-细辛醚对照品、藁本内酯对照品，加入有机溶剂制成对照品溶液；色谱条件：照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.05-0.2vt％磷酸或0.1-0.3vt％甲酸为流动相A，以甲醇为流动相B，梯度洗脱，检测波长：230-350nm。 C、淫羊藿苷的含量测定供试品制备：取所述中药组合物，加入有机溶剂提取，得供试品溶液；对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品适量，加入有机溶剂提取制成对照品溶液；色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05-0.2vt％磷酸溶液或水为流动相B；检测波长250-300nm；测定法：吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定并计算； D、熟地黄的鉴别供试品溶液制备：称取所述中药组合物，加入纯水溶解，用正丁醇萃取，静置，弃去正丁醇液，向水层加入无水乙醇，振荡，静置，弃去乙醇液，向沉淀加入甲醇，超声处理，滤过，蒸干滤液，冷却至室温，残渣加甲醇溶液使溶解，即得；对照品溶液的制备：另取水苏糖对照品适量，加有机溶剂制成对照品的溶液；鉴别：照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液，以乙酸乙酯-甲醇-水-冰醋酸为展开剂展开，喷以硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰； E、炙甘草的鉴别供试品溶液的制备：取所述中药组合物，先加入醇溶液提取，然后加入水和饱和正丁醇萃取，分取正丁醇液，蒸干正丁醇得残渣，加醇溶液溶解残渣，得供试品溶液；对照品溶液的制备：另取甘草酸铵对照品，加入有机溶剂制成对照品溶液；鉴别：照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液，以正丁醇-甲醇-浓氨试液-水为展开剂展开，在紫外灯下检视。 6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，在所述β-细辛醚的含量测定和当归的鉴定中，所述梯度洗脱程序具体为：0-25min，流动相A：流动相B的体积比为45％：55％；25-26min，流动相A：流动相B的体积比为45％：55％→42％：58％；25-38min，流动相A：流动相B的体积比为42％：58％；38-38.5min，流动相A：流动相B的体积比为42％：58％→5％：95％；38.5-42min，流动相A：流动相B的体积比为5％：95％；42.5-47min，流动相A：流动相B的体积比为5％：95％→45％：55％。 7.根据权利要求5或6所述的检测方法，其特征在于，在所述β-细辛醚的含量测定和当归的鉴定中，0-25min时，检测波长为250-260nm；25-47min，检测波长为330-340nm。 8.根据权利要求5-7中任一所述的检测方法，其特征在于，在所述β-细辛醚的含量测定和当归的鉴定中，所述供试品溶液制备的具体步骤为：取所述中药组合物0.5-3g，研细，称定重量，加入60-100vt％甲醇溶液10-30ml，称重，超声5-35min，放冷，再称重，用60-100vt％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 9.根据权利要求5-8中任一所述的中药组合物的检测方法，其特征在于，在熟地黄的鉴别中，所述展开剂为体积比为1-5：1-3：0.5-2：1-3的乙酸乙酯-甲醇-水-冰醋酸；在炙甘草的鉴别中，所述展开剂为体积比为2-8：1-3：0.1-2：1-3的正丁醇-甲醇-浓氨试液-水。 10.根据权利要求1-9中任一所述的中药组合物的检测方法，其特征在于，所述药物组合物添加常规辅料按照常规工艺直接或间接制成临床上可接受的片剂、颗粒剂、胶囊剂或口服液。 11.根据权利要求1-10中任一所述的中药组合物的检测方法，其特征在于，所述中药组合物的制备方法，包括如下步骤： (1)称取当归和石菖蒲，加水浸泡，水蒸气蒸馏提取，得挥发油和水提取液，向挥发油中加入β-环糊精和水包合，得包合物； (2)称取人参、熟地黄、制远志、麸炒白术、炒酸枣仁、炙淫羊藿、炙甘草，加水提取，得水提取液； (3)合并步骤(1)和(2)制得的水提取液，减压浓缩得清膏； (4)将步骤(3)制得的清膏干燥，制成干膏粉，加入所述包合物和常规辅料，混匀，即得。 12.根据权利要求11所述的培元固本益智的中药组合物的检测方法，其特征在于，步骤(1)提取具体方法为：称取当归和石菖蒲，粉粹，加入水，浸泡0.3-1h，然后用水蒸气蒸馏提取挥发油，提取时间为2-8h，分别收集挥发油和水提取液，水提取液滤过，备用；所述包合的具体方法为：在挥发油中加入β-环糊精和水，研磨包合20-40min，静置，过滤，收集包合物，30-50℃烘干，备用；其中，包合过程中，挥发油、水和β-环糊精的用量比为1ml：32-144ml：4-12g。
所属类别：	发明专利