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原文传递液相色谱串联质谱测定样品极长链脂肪酸的方法及试剂盒

专利名称：	液相色谱串联质谱测定样品极长链脂肪酸的方法及试剂盒
摘要：	本发明提供液相色谱串联质谱测定样品极长链脂肪酸的方法及试剂盒。该方法包括：配制不同浓度的极长链脂肪酸标准品溶液；向标准品溶液中加入稳定同位素内标混匀，加入乙腈和浓盐酸进行样品前处理；然后用正己烷提取，上清液用氮气吹干，复溶后进行液相色谱串联质谱检测；根据标准品溶液的浓度以及检测到的信号强度绘制标准曲线；用待测样本替代步骤B中的标准品溶液进行检测；根据待测样本的检测结果，对照标准曲线，获得待测样本中极长链脂肪酸的浓度，从而实现对样品中极长链脂肪酸的定量检测。本发明成功建立了液相色谱串联质谱测定样品中极长链脂肪酸的方法，该方法用样量少、可快速、特异地检测样品(特别是血清样品)中极长链脂肪酸的含量。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	中国医学科学院北京协和医院
发明人：	王丹晨;禹松林;邱玲
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-23T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201910062046.9
公开号：	CN109738539A
代理机构：	北京路浩知识产权代理有限公司
代理人：	王文君;黄爽
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	100730 北京市东城区王府井帅府园1号北京协和医院检验科
主权项：	1.液相色谱串联质谱测定样品中极长链脂肪酸的方法，其特征在于，包括以下步骤： A、配制不同浓度的极长链脂肪酸标准品溶液； B、向标准品溶液中加入稳定同位素内标混匀，加入乙腈和浓盐酸进行样品前处理；然后用正己烷提取，上清液用氮气吹干，加入复溶液，进行液相色谱串联质谱检测； C、根据标准品溶液的浓度以及检测到的信号强度绘制标准曲线； D、用待测样本替代步骤B中的标准品溶液，采用相同方法进行检测； E、根据待测样本的检测结果，对照标准曲线，获得待测样本中极长链脂肪酸的浓度，从而实现对样品中极长链脂肪酸的定量检测；其中，所述样品包括血清、血浆、羊水。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述极长链脂肪酸包括C22:0、C24:0和C26:0。 3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，C22:0的稳定同位素内标为C22:0-d4，使用浓度为1-20ng/ml，优选10.2ng/ml；和/或 C24:0的稳定同位素内标为C24:0-d4，使用浓度为1-25ng/ml，优选23.2ng/ml；和/或 C26:0的稳定同位素内标为C26:0-d4，使用浓度为1-30ng/ml，优选28.5ng/ml。 4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤B具体为：向50μl标准品溶液中加入10μl稳定同位素内标，混合震荡后加入100-500μl乙腈，再加入50μl 12mM浓盐酸，70-100℃孵育1-2h，冷却至室温；然后加入1-2ml正己烷，混合震荡，取上清液，氮气吹干，加入200μl复溶液，准备上机检测；其中，所述复溶液为甲醇。 5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤B中所用液相色谱柱为Waters C8柱；进行色谱检测所用流动相如下：流动相A：含0.1-10mM甲酸铵的乙腈水溶液；其中，所述乙腈水溶液中乙腈和水的体积比为1:9-9:1，优选6:4；流动相B：乙腈异丙醇溶液，其中乙腈和异丙醇体积比为1:9-9:1，优选8:2。 6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，液相色谱检测条件如下：柱温为30-40℃，进样量1-10μl；按以下程序进行梯度洗脱： 7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤B中进行质谱检测，采用负离子电喷雾离子化的多离子反应监测模式；离子源温度为300-400℃；雾化气、加热气和气帘气分别为55psi、55psi和30psi，碰撞气为5-20psi；喷雾电压：-3000—-5000V，去溶剂温度为400-600℃。 8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，极长链脂肪酸C22:0、C24:0和C26:0在质谱中所产生的检测信号的母离子分别具有339、367、395.2的质荷比； C22:0的子离子包含质荷比为339、385.4的子离子； C24:0的子离子包含质荷比为367、413.7的子离子； C26:0的子离子包含质荷比为395.2、441.1的子离子。 9.根据权利要求2-8任一项所述的方法，其特征在于，极长链脂肪酸C22:0的线性检测范围为0.46-235.1μM，最低检出限为0.2μM；极长链脂肪酸C24:0的线性检测范围为0.42-237.9μM，最低检出限为0.2μM；极长链脂肪酸C26:0的线性检测范围为0.04-20.18μM，最低检出限为0.02μM。 10.用于液相色谱串联质谱测定样品中极长链脂肪酸的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括极长链脂肪酸标准品溶液、稳定同位素内标、乙腈、浓盐酸、正己烷、甲醇、含0.1-10mM甲酸铵的乙腈水溶液以及乙腈异丙醇溶液中的至少一种；其中，所述极长链脂肪酸的定义同权利要求2中所述；所述稳定同位素内标的定义同权利要求3中所述；所述含0.1-10mM甲酸铵的乙腈水溶液、所述乙腈异丙醇溶液的定义同权利要求5中所述。
所属类别：	发明专利