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原文传递一种银杏酮酯片中萜内酯类和黄酮苷类成分的整合溶出度的检测及验证方法

专利名称：	一种银杏酮酯片中萜内酯类和黄酮苷类成分的整合溶出度的检测及验证方法
摘要：	本发明提供一种银杏酮酯片中萜内酯类和黄酮苷类成分的溶出度的检测方法，包括以下步骤：1）供试品溶液的制备；2）对照品溶液的制备；3）溶出溶液的制备；4）检测；5）溶出度计算。本发明还进一步提供一种银杏酮酯片中萜内酯类和黄酮苷类成分的整合溶出度的检测方法及验证方法。本发明提供的一种银杏酮酯片中萜内酯类和黄酮苷类成分的整合溶出度的检测及验证方法，能够同时测定银杏酮酯片中萜内酯类和黄酮苷类两大类成分的溶出度，计算整合溶出度，并拟合出整合溶出曲线进行相似分析，验证其可靠性，为中药整体性质的研究提供一定的研究思路。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海上药杏灵科技药业股份有限公司
发明人：	江美芳;高崎;王丹丹;朱国琴
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-30T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201910089568.8
公开号：	CN109738544A
代理机构：	上海光华专利事务所(普通合伙)
代理人：	许亦琳;余明伟
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	201703 上海市青浦区沪青平公路3500号
主权项：	1.一种银杏酮酯片中萜内酯类和黄酮苷类成分的溶出度的检测方法，包括以下步骤： 1)供试品溶液的制备：取银杏酮酯片，加入甲醇水溶液进行超声提取、离心后取上清液，加入甲醇水溶液定容后再稀释，即得供试品溶液； 2)对照品溶液的制备：将银杏酮酯片中萜内酯类和黄酮苷类成分的对照品分别加入二甲基亚砜溶解后配成相应的对照品母液，再分别取对照品母液混合后加入甲醇水溶液定容，得到对照品溶液； 3)溶出溶液的制备：取溶出介质，加入银杏酮酯片进行溶出实验后，取样离心后取上清液，再加入溶出介质稀释，即得溶出溶液； 4)检测：采用超高效液相色谱质谱联用法分别测定供试品溶液、对照品溶液及溶出溶液，根据分子质量、保留时间，分别确定供试品溶液和溶出溶液中萜内酯类和黄酮苷类成分，并根据外标法分别确定供试品溶液和溶出溶液中萜内酯类和黄酮苷类成分的含量； 5)溶出度计算：将供试品溶液与溶出溶液中萜内酯类和黄酮苷类成分的含量，按公式Ⅰ分别计算银杏酮酯片中萜内酯类和黄酮苷类成分的溶出度，所述公式Ⅰ为：溶出度％＝(Ai×V1×m2)/(Bi×V2×m1)×100％；其中，Ai：溶出溶液中各成分的含量，ng/mL；Bi：供试品溶液中各成分的含量，ng/mL；V1：溶出介质体积，mL；V2：供试品溶液体积，mL；m1：溶出溶液中加入银杏酮酯片重量，g；m2：供试品溶液制备时银杏酮酯片重量，g。 2.根据权利要求1所述的一种银杏酮酯片中萜内酯类和黄酮苷类成分的溶出度的检测方法，其特征在于，所述银杏酮酯片中萜内酯类和黄酮苷类成分包括有银杏内酯B、银杏内酯A、银杏内酯C、白果内酯、芦丁、异槲皮苷、3-O-GLC-异鼠李素、山奈酚-3-O-芸香糖、香蒲新苷。 3.根据权利要求1所述的一种银杏酮酯片中萜内酯类和黄酮苷类成分的溶出度的检测方法，其特征在于，步骤1)中，所述银杏酮酯片加入的质量mg与甲醇水溶液加入的体积mL之比为80-120：4-6。 4.根据权利要求1所述的一种银杏酮酯片中萜内酯类和黄酮苷类成分的溶出度的检测方法，其特征在于，步骤3)中，所述银杏酮酯片加入的质量mg与溶出介质加入的体积mL之比为1440-1560:450-550。 5.根据权利要求1所述的一种银杏酮酯片中萜内酯类和黄酮苷类成分的溶出度的检测方法，其特征在于，步骤4)中，所述超高效液相色谱质谱联用法选用的色谱条件，包括以下条件中任一项或多项： A1)所述色谱柱为C18色谱柱； A2)所述柱温为40-50℃； A3)所述流速为0.3-0.5ml/min； A4)所述进样量为1-5μL； A5)所述流动相为水(含甲酸)-甲醇溶液，其中，A相为水(含甲酸)，B相为甲醇； A6)所述洗脱方式为梯度洗脱，分析时间为15min。 6.根据权利要求5所述的一种银杏酮酯片中萜内酯类和黄酮苷类成分的溶出度的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序的具体为： 0-10min，A相：B相体积比为98：2-25：75； 10-10.5min，A相：B相体积比为25：75-2：98； 10.5-13min，A相：B相体积比为2：98-2：98； 13-13.5min，A相：B相体积比为2：98-98：2； 13.5-15min，A相：B相体积比为98：2-98：2。 7.根据权利要求1所述的一种银杏酮酯片中萜内酯类和黄酮苷类成分的溶出度的检测方法，其特征在于，步骤4)中，所述超高效液相色谱质谱联用法选用的质谱条件为：扫描模式为负离子条件下Sensitivity模式；扫描时间为14-16min；离子源为ESI源；离子源温度为110-130℃；毛细管电压为2-3kV；脱溶剂气流速为700-900L/h；脱溶剂气温度为300-500℃；锥孔电压为30-40V；萃取电压为3-5V；数据采集模式为MSE；扫描范围为m/z40-1500amu。 8.一种银杏酮酯片中萜内酯类和黄酮苷类成分的整合溶出度的检测方法，包括以下步骤： A)取银杏酮酯片，根据权利要求1所述的溶出度的检测方法中步骤3)，于不同溶出时间点进行溶出试验，获得一系列的溶出溶液； B)将步骤A)获得的一系列的溶出溶液，根据权利要求1所述的溶出度的检测方法中步骤4)进行测定，获得一系列的溶出溶液中各个萜内酯类和黄酮苷类成分的含量； C)将步骤B)获得的一系列的溶出溶液中各个萜内酯类和黄酮苷类成分的含量，根据权利要求1所述的溶出度的检测方法中步骤5)进行计算，获得一系列的溶出溶液中各个萜内酯类和黄酮苷类成分的溶出度； D)根据权利要求1所述的溶出度的检测方法中步骤4)获得的供试品溶液中各个萜内酯类和黄酮苷类成分的含量，按公式Ⅱ计算各个萜内酯类和黄酮苷类成分的质量权重系数，所述公式Ⅱ为：ψ＝n/ω，其中，ψ为质量权重系数；ω为成分的总含量，％；n为各成分中任意一个成分的含量，％； E)将步骤D)获得的供试品溶液中各个萜内酯类和黄酮苷类成分的质量权重系数，与步骤C)获得的一系列的溶出溶液中相应萜内酯类和黄酮苷类成分的溶出度，按公式Ⅲ计算各成分于不同溶出时间点的整合溶出度，所述公式Ⅲ为：其中，δ为整合溶出度，％；ψ为质量权重系数；A，B，C…为各成分溶出度，％；ω为成分的总含量，％；i为成分个数，n为各成分的个数集合；abcd…为各成分的含量，％。 9.一种银杏酮酯片中萜内酯类和黄酮苷类成分的整合溶出度的验证方法，包括以下步骤： a)根据权利要求8所述的整合溶出度的检测方法中步骤C)，将获得的一系列的溶出溶液中各个萜内酯类和黄酮苷类成分的溶出度为纵坐标，以不同溶出时间点为横坐标，绘制各个萜内酯类和黄酮苷类成分的溶出曲线； b)根据权利要求8所述的整合溶出度的检测方法中步骤E)，将获得的各成分于不同溶出时间点的整合溶出度为纵坐标，以不同溶出时间点为横坐标，绘制整合溶出曲线； c)将步骤a)获得的各成分的溶出曲线与步骤b)获得的整合溶出曲线，采用f2相似因子法，按公式Ⅳ进行相似度判定，所述公式Ⅳ为：其中，f2：相似因子；n：时间点的个数；Ri：整合溶出曲线在第i个时间点的溶出度，％；Ti：各成分溶出曲线在第i个时间点的溶出度，％。 10.根据权利要求9所述的一种银杏酮酯片中萜内酯类和黄酮苷类成分的整合溶出度的验证方法，其特征在于，步骤c)中，当f2≥50，判定成分的溶出曲线与整合溶出曲线相似。
所属类别：	发明专利