详情

原文传递三联真菌毒素胶体金免疫层析试纸及制备方法

专利名称：	三联真菌毒素胶体金免疫层析试纸及制备方法
摘要：	本发明公开了一种三联真菌毒素胶体金免疫层析试纸，包括按照样品流动方向依次连接的样品垫、标记垫、基膜以及吸水垫；所述标记垫包括第一金垫与第二金垫，所述第一金垫至少包含有纳米金标记的第一抗体；所述第二金垫至少包含纳米金标记的第二抗体；所述第一金垫或第二金垫上包含有纳米金标记的第三抗体；所述基膜上沿着与样品流动的相反方向依次设置有控制线、第一检测线、第二检测线以及第三检测线。本发明提供了可以同时检测三种真菌毒素的免疫层析试纸条，达到简单、快速、灵敏度高的现场检测的需求，为基层AFB1、T‑2、DON三种真菌毒素快速检测和大量样品的筛查提供方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	南京农业大学
发明人：	张海彬;鲁希;吴文达
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-10T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-17T00:00:00+0800
申请号：	CN201910023101.3
公开号：	CN109765375A
代理机构：	南京苏高专利商标事务所(普通合伙)
代理人：	陈风平
分类号：	G01N33/577(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	210095 江苏省南京市玄武区卫岗1号
主权项：	1.一种三联真菌毒素胶体金免疫层析试纸，其特征在于，包括按照样品流动方向依次连接的样品垫、标记垫、基膜以及吸水垫；所述标记垫包括第一金垫与第二金垫，所述第一金垫至少包含有纳米金标记的第一抗体；所述第二金垫至少包含纳米金标记的第二抗体；所述第一金垫或第二金垫上包含有纳米金标记的第三抗体；所述基膜上沿着与样品流动的相反方向依次设置有控制线、第一检测线、第二检测线以及第三检测线；所述第一检测线包含有与第一抗体特异性结合的第一抗原；所述第二检测线包含有与第二抗体特异性结合的第二抗原；所述第三检测线包含有与第三抗体特异性结合的第三抗原。 2.根据权利要求1所述的三联真菌毒素胶体金免疫层析试纸，其特征在于，所述第一抗体为AFB1单克隆抗体；所述第二抗体为T-2单克隆抗体，所述第三抗体为DON单克隆抗体。 3.根据权利要求2所述的三联真菌毒素胶体金免疫层析试纸，其特征在于，所述第一检测线划线的抗原为AFB1-BSA，浓度为0.2-0.6mg·mL-1；所述第二检测线划线的抗原为T-2-BSA，浓度为0.4-1.2mg·mL-1；所述第三检测线划线的抗原为DON-BSA，浓度为0.4-1.2mg·mL-1。 4.根据权利要求1所述的三联真菌毒素胶体金免疫层析试纸，其特征在于，所述第一检测线、第二检测线及第三检测线之间间隔为2-3mm；所述第三检测线与控制线之间的间隔为4-5mm。 5.根据权利要求1所述的三联真菌毒素胶体金免疫层析试纸，其特征在于，所述纳米金的粒径为20-40nm。 6.一种如权利要求1-5任一所述的三联真菌毒素胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)制备标记垫： (1a)制备胶体纳米金溶液：将氯金酸溶液置于磁力搅拌加热器，加热至沸腾时，加入柠檬酸钠溶液，持续加热至溶液颜色均匀稳定，并继续煮沸5-10min，室温自然冷却，制备纳米金粒径在20-40nm； (1b)在胶体纳米金溶液中加入抗体，制备纳米金标记的第一抗体溶液、纳米金标记的第二抗体溶液以及纳米金标记的第三抗体溶液； (1c)将步骤(1b)中标记好的抗体溶液滴加至金标垫上烘干，制备第一金垫和第二金垫； (2)制备基膜：用第一抗原-BSA溶液制备第一检测线、第二抗原-BSA溶液制备第二检测线、第三抗原-BSA制备第三检测线、羊抗鼠IgG溶液制备控制线； (3)将步骤(1)制备的第一金垫和第二金垫贴合组成标记垫，随后，依次将吸水垫、基膜、标记垫和样品垫粘合在底板上，切成条状，得到三联真菌毒素胶体金免疫层析试纸。 7.根据权利要求6所述的三联真菌毒素胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于步骤(1b)中，所述第一抗体溶液中第一抗体的浓度为8-10μg·mL-1、所述第二抗体溶液的浓度为8-10μg·mL-1，所述第三抗体溶液的浓度为6-10μg·mL-1。 8.根据权利要求6所述的三联真菌毒素胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于步骤(2)中，所述第一检测线划线的抗原为AFB1-BSA，浓度为0.2-0.6mg·mL-1；所述第二检测线划线的抗原为T-2-BSA，浓度为0.4-1.2mg·mL-1；所述第三检测线划线的抗原为DON-BSA，浓度为0.4-0.1.2mg·mL-1。 9.根据权利要求6所述的三联真菌毒素胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于步骤(2)中，所述羊抗鼠IgG溶液的浓度为0.25-0.8mg·mL-1。 10.根据权利要求6所述的三联真菌毒素胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于步骤(2)中，所述第三检测线与控制线间隔为4-5mm。
所属类别：	发明专利