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原文传递一种基于核酸适配体信号放大的血小板衍生生长因子PDGF-BB试纸条及检测方法

专利名称：	一种基于核酸适配体信号放大的血小板衍生生长因子PDGF-BB试纸条及检测方法
摘要：	本发明公开了一种基于核酸适配体信号放大的血小板衍生生长因子PDGF‑BB试纸条及检测方法。所述的血小板衍生生长因子PDGF‑BB试纸条包括底板，所述的底板上依次粘贴有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，两相邻粘贴物之间部分重叠，所述的硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，所述的结合垫上包被有胶体金‑抗体‑核酸复合物，所述的检测线上包被有PDGF‑BB的核酸适配体Apt2，所述的质控线上包被有Poly A。本发明利用胶体金侧向层析检测的方便快捷与DNA‑细胞因子的特异性相互作用，实现了细胞因子活性的快速检测。本发明的血小板衍生生长因子PDGF‑BB试纸条的快速、简便、准确、低成本的优势将会促进该种检测方法的推广应用，为药物研究和筛选提供一种新的方法和思路。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖南;43
申请人：	长沙科雅生物科技有限公司
发明人：	李志远;黄华林;韩晓博;田超;汤凤;程娜;鲁学文;刘雨杰;黄土龙;林佐贤;黄荣奇;赵惠芳;李帅
专利状态：	有效
申请日期：	2018-12-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-17T00:00:00+0800
申请号：	CN201811646135.X
公开号：	CN109765381A
代理机构：	广州科粤专利商标代理有限公司
代理人：	胡素丽;刘明星
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	410000 湖南省长沙市高新开发区文轩路27号麓谷钰园C2栋N单元9层904号房
主权项：	1.一种基于核酸适配体信号放大的血小板衍生生长因子PDGF-BB试纸条，包括底板，所述的底板上依次粘贴有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，两相邻粘贴物之间部分重叠，所述的硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，其特征在于，所述的结合垫上包被有胶体金-抗体-核酸复合物，所述的检测线上包被有PDGF-BB的核酸适配体Apt2，所述的质控线上包被有Poly A；所述的胶体金-抗体-核酸复合物是通过以下方法制备的：用胶体金标记PDGF-BB单克隆抗体，制备得到胶体金-抗体复合物，然后通过PDGF-BB单克隆抗体上的氨基与3’端修饰有羧基的Apt、Apt-Poly T2、Apt-Poly T3、Apt-Poly T4和Apt-Poly T5上带的羧基发生缩合反应，制备得到胶体金-抗体-核酸复合物；所述的Apt为PDGF-BB的核酸适配体，所述的Apt-Poly T2、Apt-Poly T3、Apt-Poly T4和Apt-Poly T5为3’端加有不同长度Poly T的Apt。 2.根据权利要求1所述的基于核酸适配体信号放大的血小板衍生生长因子PDGF-BB试纸条，其特征在于：所述的Apt的核苷酸序列为：5’-AGGGCGCGTTCTTCGTGGTTACTTTTAGTCCCG-3’；所述的Apt-Poly T2的核苷酸序列为：5’-AGGGCGCGTTCTTCGTGGTTACTTTTAGTCCCGTTTTTTTTTTTTTTT-3’；所述的Apt-Poly T3的核苷酸序列为：5’-AGGGCGCGTTCTTCGTGGTTACTTTTAGTCCCGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-3；所述的Apt-Poly T4的核苷酸序列为：5’-AGGGCGCGTTCTTCGTGGTTACTTTTAGTCCCGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-3’；所述的Apt-Poly T5的核苷酸序列为：5’-AGGGCGCGTTCTTCGTGGTTACTTTTAGTCCCGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-3’。 3.根据权利要求1所述的基于核酸适配体信号放大的血小板衍生生长因子PDGF-BB试纸条，其特征在于，所述的Poly A的核苷酸序列为：5’-AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA-3’。 4.根据权利要求1所述的基于核酸适配体信号放大的血小板衍生生长因子PDGF-BB试纸条，其特征在于，所述的PDGF-BB的核酸适配体Apt2的核苷酸序列为：5’-CAGGCTACGGCACGTAGAGCATCACCATGATCCTG-3’。 5.根据权利要求1所述的基于核酸适配体信号放大的血小板衍生生长因子PDGF-BB试纸条，其特征在于，所述的底板为PVC底板。 6.根据权利要求1所述的基于核酸适配体信号放大的血小板衍生生长因子PDGF-BB试纸条，其特征在于，所述的检测线和质控线之间的距离为3mm。 7.一种权利要求1-6任一项所述的基于核酸适配体信号放大的血小板衍生生长因子PDGF-BB试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： 1)样品垫的制备：将玻璃纤维膜浸泡在样品垫处理液中，取出干燥，制备得到样品垫； 2)结合垫的制备：用胶体金标记PDGF-BB单克隆抗体，制备得到胶体金-抗体复合物，然后通过PDGF-BB单克隆抗体上的氨基与3’端修饰有羧基的Apt、Apt-Poly T2、Apt-Poly T3、Apt-Poly T4和Apt-Poly T5上带的羧基发生缩合反应，制备得到胶体金-抗体-核酸复合物，经封闭、老化后喷到玻璃纤维膜上，干燥，制备得到结合垫； 3)将PDGF-BB的核酸适配体Apt2和Poly A分别划在硝酸纤维素膜上，以PDGF-BB的核酸适配体Apt2作为检测线，以Poly A作为质控线； 4)将样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸依次粘贴到底板上，两相邻粘贴物之间部分重叠，得到基于核酸适配体信号放大的血小板衍生生长因子PDGF-BB试纸条。 8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述的样品垫处理液包括4％TritonX-100、1％BSA、2％蔗糖、2％PEG-4000、100mM硼酸、0.1％SDS和0.5μg/mL鲑鱼精DNA，余量为水，pH 9.0。 9.一种基于核酸适配体信号放大的血小板衍生生长因子PDGF-BB的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：将待测样品滴加到权利要求1-6任一项所述的血小板衍生生长因子PDGF-BB试纸条的样品垫上，然后往样品垫上滴加上样缓冲液，静置5～10min后观察结果，若检测线和质控线都显示红色条带，则判断为阳性，待测样品中含有PDGF-BB，若检测线不显示红色条带，质控线显示红色条带，则判断为阴性，待测样品中不含有PDGF-BB。
所属类别：	发明专利