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原文传递 一种MEK1蛋白潜在抑制剂的筛选方法
专利名称: 一种MEK1蛋白潜在抑制剂的筛选方法
摘要: 本发明实施例公开了一种MEK1蛋白潜在抑制剂的筛选方法,其特征在于,包括如下步骤:(a)获取高表达MEK1蛋白的细胞株的细胞膜,再将细胞膜和硅胶制备得到细胞膜色谱柱;(b)将待测样品置入细胞膜色谱柱内,采用洗涤液进行洗涤,再采用洗脱液进行洗脱,并收集洗脱液;(c)采用高效液相色谱法分离检测洗脱液中物质,所得物质即为MEK1蛋白潜在的抑制剂。本发明通过将细胞膜和硅胶制备得到细胞膜色谱柱,使得细胞膜色谱柱不仅具有色谱的分离能力,同时兼具生物活性,使得本发明筛选方法具有较强的特异性,能够实现对MEK1蛋白潜在抑制剂的筛选。
专利类型: 发明专利
国家地区组织代码: 江苏;32
申请人: 苏州科技大学
发明人: 郭伟强
专利状态: 有效
申请日期: 2018-11-27T00:00:00+0800
发布日期: 2019-05-17T00:00:00+0800
申请号: CN201811428911.9
公开号: CN109765324A
代理机构: 北京知呱呱知识产权代理有限公司
代理人: 武媛;吕学文
分类号: G01N30/88(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址: 215000 江苏省苏州市滨河路298号
主权项: 1.一种MEK1蛋白潜在抑制剂的筛选方法,其特征在于,包括如下步骤: (a)获取高表达MEK1蛋白的细胞株的细胞膜,再将细胞膜和硅胶制备得到细胞膜色谱柱; (b)将待测样品置入细胞膜色谱柱内,采用洗涤液进行洗涤,再采用洗脱液进行洗脱,并收集洗脱液; (c)采用高效液相色谱法分离检测洗脱液中物质,所得物质即为MEK1蛋白潜在的抑制剂。 2.根据权利要求1所述的筛选方法,其特征在于,所述高表达MEK1蛋白的细胞株为A549细胞株。 3.根据权利要求1所述的筛选方法,其特征在于,所述高表达MEK1蛋白的细胞株通过如下步骤制备得到: 在表达MEK1蛋白的细胞中,采用基因工程方法得到表达MEK1蛋白的基因,将基因克隆至真核表达载体上,再将真核表达载体转染至表达MEK1蛋白的细胞中,对转染细胞进行稳定筛选得到高表达MEK1蛋白的细胞株。 4.根据权利要求1-3任一所述的筛选方法,其特征在于,所述高表达MEK1蛋白的细胞株的细胞膜中MEK1蛋白含量为不小于100pg/ml。 5.根据权利要求1所述的筛选方法,其特征在于,所述细胞膜色谱柱通过采用磷酸盐缓冲液重悬细胞膜,随后,向细胞膜悬液中添加硅胶,搅拌均匀,静置过夜,湿法装柱得到所述细胞膜色谱柱。 6.根据权利要求5所述的筛选方法,其特征在于,所述细胞膜中蛋白含量与硅胶质量比为1∶(80-100)。 7.根据权利要求1所述的筛选方法,其特征在于,所述洗涤采用的洗涤液体积为3-5个柱体积且洗涤速度为1-2ml/min。 8.根据权利要求1或7所述的筛选方法,其特征在于,所述洗涤液为pH7.0的磷酸盐缓冲液。 9.根据权利要求1所述的筛选方法,其特征在于,所述洗脱采用洗脱液的体积为3-5个柱体积且洗脱速度为1-2ml/min。 10.根据权利要求1或9所述的筛选方法,其特征在于,所述洗脱液为pH3-4的磷酸盐缓冲液。
所属类别: 发明专利
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