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原文传递一种β-痕迹蛋白检测试剂盒及制备方法

专利名称：	一种β-痕迹蛋白检测试剂盒及制备方法
摘要：	本发明涉及一种β‑痕迹蛋白检测试剂，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，所述试剂R1主要由缓冲液1、稳定剂1、防腐剂1、EDTA、增凝剂和保护剂1组成；所述试剂R2主要由交联β‑痕迹蛋白抗体的聚苯乙烯胶乳微球、缓冲液2、稳定剂2、防腐剂2、保护剂2组成，其中聚苯乙烯胶乳微球与β‑痕迹蛋白抗体之间以共价交联方式连接。本发明还涉及该种β‑痕迹蛋白检测试剂的制备方法。该检测试剂具有检测灵敏、稳定性高、结果准确等优点，应用该试剂制备的检测试剂盒可广泛应用于肾脏疾病进行筛查检测、病情监测、预后评估等。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	无锡市人民医院
发明人：	王春新;韦彦余;王军峰;贾梦玥
专利状态：	有效
申请日期：	2018-12-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-21T00:00:00+0800
申请号：	CN201811594811.3
公开号：	CN109781990A
代理机构：	苏州六一专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	顾传虎
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	214023 江苏省无锡市清扬路299号
主权项：	1.一种β-痕迹蛋白检测试剂，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，其特征在于，所述试剂R1主要由缓冲液1、稳定剂1、防腐剂1、EDTA、增凝剂和保护剂1组成；所述试剂R2主要由交联β-痕迹蛋白抗体的聚苯乙烯胶乳微球、缓冲液2、稳定剂2、防腐剂2、保护剂2组成，其中聚苯乙烯胶乳微球与β-痕迹蛋白抗体之间以共价交联方式连接。 2.根据权利要求1所述的β-痕迹蛋白检测试剂，其特征在于，所述的β-痕迹蛋白抗体为鼠抗人β-痕迹蛋白抗体、羊抗人β-痕迹蛋白IgG抗体、兔抗人β-痕迹蛋白IgG抗体、鸡抗人β-痕迹蛋白IgY抗体的一种或者多种的组合。 3.根据权利要求2所述的β-痕迹蛋白检测试剂，其特征在于，所述的β-痕迹蛋白抗体为鸡抗人β-痕迹蛋白IgY抗体。 4.根据权利要求1所述的β-痕迹蛋白检测试剂，其特征在于，所述试剂R1中的缓冲液1选自Hepes缓冲液、Tris-HCl缓冲液、MOPS缓冲液、PBS缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼砂缓冲液中的任意一种，缓冲液的pH为7.0～9.0，浓度为25～500mmol/L；所述试剂R2中的缓冲液2选自PBS缓冲液、硼砂缓冲液、甘氨酸缓冲液、Hepes缓冲液、GOODS缓冲液、MOPS缓冲液中任意一种，缓冲液的pH为7.0～9.0，浓度为25～500mmol/L。 5.根据权利要求1所述的β-痕迹蛋白检测试剂，其特征在于，所述试剂R1中的增凝剂包括下列组分：水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠和甘氨酸，且水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠、甘氨酸的总浓度为3.5～7.5g/L，缓冲液1的pH值为7.2－7.6。 6.根据权利要求1所述的β-痕迹蛋白检测试剂，其特征在于，所述试剂R1中的稳定剂1选自KCl、NaCl、CaCl2中的任意一种或几种，其质量浓度为0.5％～10％；所述试剂R2中的稳定剂2采用离子稳定剂和悬浮稳定剂配合使用；其中离子稳定剂为NaCl、KCl、Na2CO3、Na2SO4或者K2SO4中的任意一种或几种，悬浮稳定剂为PEG8000、蔗糖、甘油或者葡萄糖。 7.根据权利要求1所述的β-痕迹蛋白检测试剂，其特征在于，所述试剂R1中的防腐剂1为叠氮钠、硫柳汞或者ProClin300，所述试剂R2中的防腐剂2为叠氮钠、硫柳汞或ProClin300；所述试剂R1中的增凝剂为PEG8000或者葡聚糖；所述试剂R1中的保护剂1为牛血清白蛋白；所述试剂R2中的保护剂2为牛血清白蛋白。 8.根据权利要求1所述的β-痕迹蛋白检测试剂，其特征在于，所述试剂R2中的聚苯乙烯乳胶微球的表面官能团为氨基、羧基、酰肼、醛基或环氧基，聚苯乙烯乳胶微球的粒径在100～600nm。 9.根据权利要求1所述的β-痕迹蛋白检测试剂，其特征在于，所述试剂R1中的EDTA的浓度为10～100mmol/L。 10.制备权利要求1～9中任一项所述的β-痕迹蛋白检测试剂的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤： (1)试剂R1的制备：在缓冲液1中加入稳定剂1、增凝剂、防腐剂1、保护剂1和EDTA，搅拌混合均匀，即得试剂R1； (2)试剂R2的制备：步骤一：将β-痕迹蛋白IgY抗体进行2-8℃透析，再用缓冲液2将β-痕迹蛋白IgY抗体稀释至0.5-2mg/ml，得到β-痕迹蛋白IgY抗体稀释液；将聚苯乙烯胶乳微球用蒸馏水离心、洗涤3次；步骤二：用缓冲液2将经过步骤一洗涤后的聚苯乙烯胶乳微球稀释到质量浓度为1％，再加入质量浓度为0.01％-0.1％的EDC，在室温下搅拌反应15-45min，反应结束后10000-15000rpm离心洗涤以除去未反应的EDC，然后加入步骤一得到的β-痕迹蛋白IgY抗体稀释液，室温下搅拌反应15-45min，再加入终止液终止反应，将得到的反应液10000-15000rpm离心，用缓冲液2洗涤沉淀，重复离心洗涤3次，最后加入缓冲液2、防腐剂2、稳定剂2、保护剂2搅拌混合均匀即得试剂R2。
所属类别：	发明专利