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原文传递一种定量检测抗虫蛋白Cry1C的酶联免疫试剂盒

专利名称：	一种定量检测抗虫蛋白Cry1C的酶联免疫试剂盒
摘要：	本发明公开了属于生物工程技术领域的一种定量检测抗虫蛋白Cry1C的酶联免疫试剂盒，所述酶联免疫试剂盒由包被捕获抗体的微孔反应板、样品处理液、生物素标记的检测抗体、标准品、辣根过氧化物酶标记的亲和素、生物素标记的抗体稀释液、辣根过氧化物酶标记的亲和素稀释液、浓缩洗涤液、底物溶液、终止液和板贴组成。本发明的试剂盒操作简便、能同时快速检测大批样品，具有高灵敏度、高特异性的特点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	中国农业科学院生物技术研究所
发明人：	刘卫晓;李亮;董美;金芜军;苗朝华;张哲
专利状态：	有效
申请日期：	2018-12-27T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-21T00:00:00+0800
申请号：	CN201811612746.2
公开号：	CN109781993A
代理机构：	北京成实知识产权代理有限公司
代理人：	叶立涛
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100044 北京市海淀区中关村南大街12号
主权项：	1.一种定量检测抗虫蛋白Cry1C的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述酶联免疫试剂盒由包被捕获抗体的微孔反应板、样品处理液、生物素标记的检测抗体、标准品、辣根过氧化物酶标记的亲和素、生物素标记的抗体稀释液、辣根过氧化物酶标记的亲和素稀释液、浓缩洗涤液、底物溶液、终止液和板贴组成。 2.根据权利要求1所述定量检测抗虫蛋白Cry1C的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述捕获抗体由保藏号为CGMCC No.16698的杂交瘤细胞株5E10 1C6分泌得到的，捕获抗体的检测范围0.39ng/mL-6.25ng/mL。 3.根据权利要求1所述定量检测抗虫蛋白Cry1C的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述检测抗体由保藏号为CGMCC No.16697的杂交瘤细胞株3H3 1D2分泌得到。 4.权利要求1所述定量检测抗虫蛋白Cry1C的酶联免疫试剂盒检测抗虫蛋白Cry1C的方法，其特征在于，包括以下步骤： 1)将权利要求1所述的样品处理液、生物素标记的检测抗体、标准品、辣根过氧化物酶标记的亲和素、生物素标记的抗体稀释液、辣根过氧化物酶标记的亲和素稀释液、浓缩洗涤液、底物溶液、终止液置于18-25℃，平衡至少30分钟； 2)分别设标准品孔、待测样本孔，在每孔中加入标准品或待测样本进行温育，然后弃去液体，甩干后加入生物素标记的检测抗体工作液进行温育，弃去孔内液体，洗涤甩干后每孔加入辣根过氧化物酶标记的亲和素工作液，进行温育，弃去孔内液体，洗涤甩干后每孔加入底物溶液，避光显色后每孔加入终止溶液，混匀在反应终止后5分钟内用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度OD值； 3)数据处理：将标准品及样本值减去S0孔数值后绘制曲线，如果设置复孔，则取其平均值计算，以标准品的浓度为纵坐标，OD值为横坐标，绘出标准曲线，根据样本OD值，由标准曲线查出相应的浓度。 5.根据权利要求4所述定量检测抗虫蛋白Cry1C的酶联免疫试剂盒检测抗虫蛋白Cry1C的方法，其特征在于，所述步骤2)中生物素标记的检测抗体工作液是通过将生物素标记的检测抗体液用生物素标记的抗体稀释液按体积比1:100倍进行稀释得到的；所述辣根过氧化物酶标记的亲和素工作液是通过将辣根过氧化物酶标记的亲和素用辣根过氧化物酶标记的亲和素稀释液按体积比1:100倍进行稀释得到的。 6.根据权利要求4所述定量检测抗虫蛋白Cry1C的酶联免疫试剂盒检测抗虫蛋白Cry1C的方法，其特征在于，所述步骤2)中，每孔分别加标准品或待测样本80-120μL，轻轻晃动混匀，覆上板贴，37℃温育1.5-2.5小时；弃去液体，甩干，不用洗涤；每孔加生物素标记抗体工作液80-120μL，覆上新的板贴，37℃温育0.5-1.5小时；弃去孔内液体，甩干，洗板2-4次，每次浸泡1-3分钟，150-250μL/每孔，甩干；每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液80-120μL，覆上新的板贴，37℃温育0.5-1.5小时；弃去孔内液体，甩干，洗板4-6次，每次浸泡1-3分钟，150-250μL/每孔，甩干；依序每孔加底物溶液90μL，37℃避光显色15-30分钟；依序每孔加终止溶液50μL，终止反应。
所属类别：	发明专利