专利名称: |
利用HTRF一步法筛选激酶抑制剂的方法 |
摘要: |
本发明公开了一种利用HTRF一步法筛选激酶抑制剂的方法,属于抑制剂筛选方法领域。一种利用HTRF一步法筛选激酶抑制剂的方法,包括如下步骤:在微孔板中依次加入待检测的化合物、激酶、底物和ATP,进行共同孵育;在微孔板中依次加入偶联有Donor的识别底物磷酸化位点的抗体和偶联Acceptor的识别底物上生物素的链霉亲和素;室温孵育,用酶标仪读数检测荧光,665nm/620nm的比值为原始数据;本发明的优点在于,提供新的方法,实现了生化水平上筛选激酶抑制剂,无需构建细胞,更加直接快捷。 |
专利类型: |
发明专利 |
国家地区组织代码: |
上海;31 |
申请人: |
浠思(上海)生物技术有限公司 |
发明人: |
王心媛 |
专利状态: |
有效 |
申请日期: |
2019-02-15T00:00:00+0800 |
发布日期: |
2019-05-28T00:00:00+0800 |
申请号: |
CN201910116718.X |
公开号: |
CN109813915A |
分类号: |
G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33 |
申请人地址: |
200131 上海市浦东新区中国(上海)自由贸易试验区张衡路1299号2幢401室 |
主权项: |
1.一种利用HTRF一步法筛选激酶抑制剂的方法,其特征在于包括如下步骤: 步骤一,在微孔板中依次加入待检测的化合物、激酶、底物和ATP,进行共同孵育; 步骤二,在微孔板中依次加入偶联有Donor的识别底物磷酸化位点的抗体和偶联Acceptor的识别底物上生物素的链霉亲和素; 步骤三,室温孵育,用酶标仪读数检测荧光,665nm/620nm的比值为原始数据; 其中上述偶联Donor的抗体识别磷酸化位点,偶联Acceptor的链霉亲和素与底物一端的生物素结合,从而形成三个物质聚合的复合物,拉近Donor和Acceptor的距离,能量能够从Donor上转移到Acceptor上,使Acceptor产生荧光;若样品能抑制底物磷酸化,则随着抑制剂浓度的增加,665nm/620nm的比值降低;待稳定后测定荧光值的变化便可量化阻断剂的效价IC50;检测的为HTRF两个荧光665nm和620nm,即时间分辨荧光,当665nm/620nm的比值越低,阻断剂的效应越高。 2.根据权利要求1所述的利用HTRF一步法筛选激酶抑制剂的方法,其特征在于:上述微孔板包括96孔板,384孔板和1536孔板。 3.根据权利要求1所述的利用HTRF一步法筛选激酶抑制剂的方法,其特征在于:该筛选方法的反应体系为8ul-20ul。 4.根据权利要求1所述的利用HTRF一步法筛选激酶抑制剂的方法,其特征在于:可用于筛选的阻断剂包括各种来源的抗体,蛋白,多肽及小分子。 |
所属类别: |
发明专利 |