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利用HTRF一步法筛选Bcl-2家族成员之间结合的阻断剂的方法
| 专利名称： | 利用HTRF一步法筛选Bcl-2家族成员之间结合的阻断剂的方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种利用HTRF一步法筛选Bcl‑2家族成员之间结合的阻断剂的方法，属于阻断剂筛选方法领域。利用HTRF一步法筛选Bcl‑2家族成员之间结合(如Mcl1/BAK)的阻断剂的方法，包括如下步骤：配置已构建好的带有不同标签的Mcl1及BAK蛋白，待筛选样品；在微孔板中依次加入待筛选样品Mcl1及BAK蛋白，上述两种对应的抗标签抗体，分别偶联Donor和Acceptor；室温孵育，用酶标仪读数检测荧光，665nm/620nm的比值为原始数据；本发明实现了生化水平上筛选Bcl‑2家族成员之间结合(如Mcl1/BAK)的阻断剂，无需构建细胞，更加直接快捷。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 上海;31 |
| 申请人： | 浠思(上海)生物技术有限公司 |
| 发明人： | 王心媛 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2019-02-15T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-05-28T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201910116956.0 |
| 公开号： | CN109813916A |
| 分类号： | G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33 |
| 申请人地址： | 200131 上海市浦东新区中国(上海)自由贸易试验区张衡路1299号2幢401室 |
| 主权项： | 1.一种利用HTRF一步法筛选Bcl-2家族成员之间结合的阻断剂的方法，其特征在于包括如下步骤： 步骤一，配置已构建好的带有不同标签的Mcl1及BAK蛋白，待筛选样品； 步骤二，在微孔板中依次加入待筛选样品Mcl1及BAK蛋白，上述两种对应的抗标签抗体，分别偶联Donor和Acceptor； 步骤三，室温孵育，用酶标仪读数检测荧光，665nm/620nm的比值为原始数据； 其中上述偶联Donor和Acceptor的两种标签抗体分别检测相互作用的蛋白Mcl1和BAK，从而形成四个物质聚合的复合物，拉近Donor和Acceptor的距离，能量能够从Donor上转移到Acceptor上，使Acceptor产生荧光；若样品能抑制二者结合，则随着阻断剂浓度的增加，665nm/620nm的比值降低；待稳定后测定荧光值的变化便可量化阻断剂的效价IC50；检测的为HTRF两个荧光665nm和620nm，即时间分辨荧光，当665nm/620nm的比值越低，阻断剂的效应越高。 2.根据权利要求1所述的利用HTRF一步法筛选Bcl-2家族成员之间结合的阻断剂的方法，其特征在于：上述Mcl1和BAK为重组蛋白，带有不同标签。 3.根据权利要求1所述的利用HTRF一步法筛选Bcl-2家族成员之间结合的阻断剂的方法，其特征在于：上述微孔板包括96孔板，384孔板和1536孔板。 4.根据权利要求1所述的利用HTRF一步法筛选Bcl-2家族成员之间结合的阻断剂的方法，其特征在于：该筛选方法的反应体系为8ul-20ul。 5.根据权利要求1所述的利用HTRF一步法筛选Bcl-2家族成员之间结合的阻断剂的方法，其特征在于：用于筛选的阻断剂包括各种来源的抗体，蛋白，多肽及小分子。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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