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原文传递一种黑骨藤有效部位群的HPLC指纹图建立方法

专利名称：	一种黑骨藤有效部位群的HPLC指纹图建立方法
摘要：	本发明公开了一种黑骨藤有效部位群的HPLC指纹图的建立方法。该方法具有简便、稳定、精密度高、重现性好等优点；用该方法还能较为全面地反映黑骨藤有效部位群中所含化学成分的种类与数量，进而对其质量进行整体描述和评价。且用该方法检测到的黑骨藤有效部位群指纹图谱化学成分相对较多、各特征峰高度比例适中，基线较平稳，分离度、峰形均较好，柱效较高。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	贵州;52
申请人：	贵阳中医学院
发明人：	刘育辰;刘刚;张玲玲;杨洪秀;杨婉珠;金文渊
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-08T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-31T00:00:00+0800
申请号：	CN201910016854.1
公开号：	CN109828064A
代理机构：	北京联创佳为专利事务所(普通合伙)
代理人：	张梅;赵恒英
分类号：	G01N30/06(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	550025 贵州省贵阳市花溪区大学城栋青南路
主权项：	1.一种黑骨藤有效部位群的HPLC指纹图建立方法，其特征在于：包括以下步骤： (1)混合对照品溶液的制备：取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和异绿原酸C标准品，用甲醇定容为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和异绿原酸C浓度均为0.005-0.015g·mL-1混合对照品溶液； (2)供试品溶液的制备：精密称定黑骨藤粗粉100.0g，用乙醇回流提取，抽滤，浓缩，用蒸馏水定容1000mL，得样品溶液；精密称取D101大孔吸附树脂装入层析柱，蒸馏水冲洗至层析柱下端流出液体清澈无色后，将样品溶液上样进行吸附，待吸附完全后以蒸馏水洗脱，然后以乙醇洗脱，收集层析柱流出的乙醇部分，浓缩，烘干，研磨，得黑骨藤有效部位群粉末；精密称取黑骨藤有效部位群粉末，用甲醇定容，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，得供试品溶液； (3)指纹图谱的制作：色谱条件：色谱柱：XtimateC18，4.6×250mm，5μm；流动相：乙腈为A相，0.1％磷酸水溶液为B相；梯度洗脱，检测波长为360nm，流速为1mL·min-1，柱温38℃，进样量10μL；记录色谱图得到黑骨藤有效部位群的HPLC指纹图谱； (4)标准指纹谱图的确认：按照上述提供的方法，对多批次黑骨藤有效部位群建立了HPLC指纹图谱，通过分析比较确定了24个共有峰，这些共有峰构成了黑骨藤有效部位群的指纹特征，作为黑骨藤有效部位群的标准指纹图谱。 2.如权利要求1所述的黑骨藤有效部位群的HPLC指纹图建立方法，其特征在于：所述混合对照品溶液这样制备：取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和异绿原酸C标准品，用甲醇定容为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和异绿原酸C浓度均为0.01mg·mL-1混合对照品溶液。 3.如权利要求1所述的黑骨藤有效部位群的HPLC指纹图建立方法，其特征在于：所述供试品溶液这样制备：精密称定黑骨藤粗粉100.0g，用70％乙醇回流提取三次，加入的乙醇量分别为8倍、8倍、6倍，提取时间分别为1.5h、1.5h、1.0h，将三次滤液合并，抽滤，浓缩至180-220mL，用蒸馏水定容至1000mL，得样品溶液；精密称取100gD101大孔吸附树脂装入层析柱，蒸馏水冲洗至层析柱下端流出液体清澈无色后，将1000mL样品溶液上样进行吸附，待吸附完全后以1200mL蒸馏水洗脱，然后以2500mL70％乙醇洗脱，收集层析柱流出的70％乙醇部分，浓缩，烘干，研磨，得黑骨藤有效部位群粉末；精密称取黑骨藤有效部位群粉末50.0mg，用70％甲醇定容至10mL，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，得供试品溶液。 4.如权利要求1所述的黑骨藤有效部位群的HPLC指纹图建立方法，其特征在于：所述的梯度洗脱程序是：0～15min，11％～11％A；15～30min，11％～18％A；30～40min，18％～18％A；40～50min，18％～23％A；50～60min，23％～25％A；60～85min，25％～32％A。 5.如权利要求1所述的黑骨藤有效部位群的HPLC指纹图建立方法，其特征在于：所述24个共有峰，以3号峰绿原酸为参照峰，其相对保留时间分别为0.570、0.595、1.000、1.110、1.587、1.851、1.981、2.117、2.177、2.436、2.561、2.720、3.317、4.092、4.277、4.360、4.443、4.580、4.844、4.886、5.730、5.879、6.169、6.424。
所属类别：	发明专利