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一种基于微膜法的超微量蛋白定量检测方法
| 专利名称： | 一种基于微膜法的超微量蛋白定量检测方法 |
| 摘要： | 一种基于微膜法的超微量蛋白定量检测方法，包括以下步骤：步骤一、在0.45μm孔径的水系微孔滤膜载体上进行点样，对纳克级蛋白进行标准定量，得到每个蛋白点灰度面积值后绘制标准的定量曲线；步骤二、将待测样本按照步骤一的方式，在0.45μm孔径的水系微孔滤膜载体上进行点样和定量，得到待测样本每个蛋白点灰度面积值；步骤三、将待测样本每个蛋白点灰度面积值代入步骤一的标准定量曲线进行计算，得出待测样本蛋白含量；本发明灵敏度更高，最小检测蛋白量达到50ng，待测样品体积为1μl；在50‑1000ng范围内蛋白有较好的线性关系。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 陕西;61 |
| 申请人： | 西安交通大学 |
| 发明人： | 田中民;林文娟;郑兆斌;杨哲 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2019-01-22T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-05-31T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201910057990.5 |
| 公开号： | CN109828117A |
| 代理机构： | 西安智大知识产权代理事务所 |
| 代理人： | 弋才富 |
| 分类号： | G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33 |
| 申请人地址： | 710049 陕西省西安市碑林区咸宁西路28号 |
| 主权项： | 1.一种基于微膜法的超微量蛋白定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤一、在0.45μm孔径的水系微孔滤膜载体上进行点样，对纳克级蛋白进行标准定量，得到每个蛋白点灰度面积值后绘制标准的定量曲线； 步骤二、将待测样本按照步骤一的方式，在0.45μm孔径的水系微孔滤膜载体上进行点样和定量，得到待测样本每个蛋白点灰度面积值； 步骤三、将待测样本每个蛋白点灰度面积值代入步骤一的标准定量曲线进行计算，得出待测样本蛋白含量。 2.根据权利要求1所述的一种基于微膜法的超微量蛋白定量检测方法，其特征在于，所述的步骤一具体过程如下： (1)在0.45μm孔径的水系微孔滤膜上用铅笔画出方格，将标准品样本设置多个梯度溶液，每个方格点1μl样品，每个样品重复点三次； (2)点样结束后，使滤膜自然干燥，或用电吹风吹干，避免滤纸出现褶皱； (3)将滤膜置于考染液中浸泡5分钟；水洗3min；再用脱色液脱色10分钟； (4)扫描仪进行灰度扫描；得到每个蛋白点灰度面积值(Volume值)后绘制定量曲线。 3.根据权利要求2所述的一种基于微膜法的超微量蛋白定量检测方法，其特征在于，所述的考染液为：1.0g考马斯亮蓝R-250溶于450ml甲醇、450ml超纯水以及100ml冰醋酸溶液中得到的混合液。 4.根据权利要求2所述的一种基于微膜法的超微量蛋白定量检测方法，其特征在于，所述的脱色液为：甲醇100mL、冰醋酸100ml和超纯水800ml的混合液。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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