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原文传递益母草中核苷类成分的检测方法

专利名称：	益母草中核苷类成分的检测方法
摘要：	本发明公开了一种益母草中核苷类成分的检测方法，本发明通过大量实验筛选，采用超高效液相色谱检测，该检测方法可以同时检测益母草中共22种核苷类化合物。实验结果表明，该方法检测灵敏度高，稳定性好，可以客观、全面、准确地评价益母草药材及其提取物与制剂的质量，对控制质量和保证临床疗效具有重要意义。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	陕西;61
申请人：	陕西中医药大学
发明人：	唐于平;谭亚杰;周桂生;严辉;郭盛;乐世俊;陈艳琰;杨洁
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-04T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-31T00:00:00+0800
申请号：	CN201910269364.2
公开号：	CN109828060A
代理机构：	南京经纬专利商标代理有限公司
代理人：	杨海军
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	712046 陕西省咸阳市西咸新区西咸大道中段1号
主权项：	1.一种益母草中核苷类成分的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤(1)对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的尿嘧啶、鸟嘌呤、鸟苷-5′-单磷酸、胞苷-5′-单磷酸、3′，5′-环磷酸鸟苷钠盐、腺苷-3′，5′-环单磷酸、2′-脱氧尿苷、2′-脱氧肌苷、2′-脱氧腺苷、2′-脱氧胞苷、2′-脱氧鸟苷、腺苷、腺嘌呤、胞苷、胞嘧啶、鸟苷、次黄嘌呤、肌苷、胸苷、胸腺嘧啶、尿苷和黄嘌呤的混合对照品溶液；步骤(2)供试品溶液的制备精密称定益母草样品，置于具塞锥形瓶中，精密加入水，称重，超声提取，静置放冷并补足失重，摇匀，离心取上清液，滤过，即得益母草供试品溶液；步骤(3)线性回归方程的建立取步骤(1)的混合对照品依次稀释5倍，得到系列浓度的对照品溶液，依次注入UPLC-TQ/MS2，以系列对照品浓度作为横坐标X，对应的峰面积为纵坐标Y，对各化学成分进行线性回归分析并计算线性回归方程；步骤(4)含量测定取步骤(2)的益母草供试品溶液注入UPLC-TQ/MS2进行分析，将峰面积代入步骤(3)的线性回归方程，计算供试品溶液中核苷类成分的含量。 2.根据权利要求1所述的益母草中核苷类成分的检测方法，其特征在于，步骤(1)对照品的制备方法为：精密称取干燥至恒重的各氨基酸对照品适量，加水制成浓度分别为：尿嘧啶0.034mg·mL-1、鸟嘌呤0.006mg·mL-1、鸟苷-5′-单磷酸0.036mg·mL-1、胞苷-5′-单磷酸0.042mg·mL-1、3′，5′-环磷酸鸟苷钠盐0.038mg·mL-1、腺苷-3′，5′-环单磷酸0.035mg·mL-1、2′-脱氧尿苷0.047mg·mL-1、2′-脱氧肌苷0.041mg·mL-1、2′-脱氧腺苷0.047mg·mL-1、2′-脱氧胞苷0.033mg·mL-1、2′-脱氧鸟苷0.040mg·mL-1、腺苷0.047mg·mL-1、腺嘌呤0.045mg·mL-1、胞苷0.037mg·mL-1、胞嘧啶0.046mg·mL-1、鸟苷0.042mg·mL-1、次黄嘌呤0.003mg·mL-1、肌苷0.041mg·mL-1、胸苷0.042mg·mL-1、胸腺嘧啶0.037mg·mL-1、尿苷0.044mg·mL-1、黄嘌呤0.004mg·mL-1的混合对照品贮备液。 3.根据权利要求1所述的益母草中核苷类成分的检测方法，其特征在于，步骤(3)和步骤(4)中的UPLC-TQ/MS2的色谱条件为：采用Waters Acquity UPLC BEH Amide(2.1mm×100mm,1.7μm)色谱柱，流动相：5mmol·L-1甲酸铵、5mmol·L-1乙酸铵和0.2％甲酸水溶液为A相；1mmol·L-1甲酸铵、1mmol·L-1乙酸铵和0.2％甲酸乙腈溶液为B相，梯度洗脱，流速0.40mL·min-1，柱温30℃，进样体积2.0μL。 4.根据权利要求3所述的益母草中核苷类成分的检测方法，其特征在于，梯度洗脱方式为：0–3min，10％A；3–9min，10％-18％A；9–15min1，18％–20％A；15–16min，20％–46％A；16–18min，46％。 5.根据权利要求1所述的益母草中核苷类成分的检测方法，其特征在于，步骤(3)和步骤(4)中的UPLC-TQ/MS2的质谱条件为：离子化模式采用ESI+/ESI-；检测方式采用多反应检测模式MRM；源喷射电压：5500V；离子源气体1N2压力：40psi；离子源气体2N2压力：40psi；气帘气体N2压力：30psi；脱气温度550℃；离子源温度120℃；碰撞气流量0.15mL·min-1；脱溶剂气流量1000L h-1；锥孔气流量：20L h-1；22个核苷类成分的质谱参数见下表； 6.根据权利要求1所述的益母草中核苷类成分的检测方法，其特征在于，步骤(3)中22种核苷线性回归方程如下表：
所属类别：	发明专利