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原文传递益母草的质量检测方法

专利名称：	益母草的质量检测方法
摘要：	本发明公开了一种益母草质量检测方法，该方法包括步骤(1)混合对照品溶液的制备；步骤(2)供试品溶液的制备；步骤(3)线性回归方程的建立和步骤(4)含量测定。本发明通过大量实验筛选，采用/MS2检测益母草中有效成分，该检测方法可以同时快速的检测益母草中24种化合物(包括3种生物碱类成分、4种酚酸类成分、5种苯丙素类成分、11种黄酮类成分和1种环烯醚萜苷类成分)。该方法检测灵敏度高，稳定性好，可以客观、全面、准确地评价益母草药材及其提取物与制剂的质量，对控制质量和保证临床疗效具有重要意义。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	南京市中西医结合医院
发明人：	高杨
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201910455273.8
公开号：	CN110057945A
代理机构：	南京经纬专利商标代理有限公司
代理人：	杨海军
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	210014 江苏省南京市玄武区孝陵卫179号
主权项：	1.一种益母草质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤(1)混合对照品溶液的制备精密称取对照品盐酸益母草碱、盐酸水苏碱、汉黄芩素、山柰酚-3-O-芸香糖苷、毛蕊花糖苷、葫芦巴碱、益母草苷、红景天苷、绿原酸、对羟基苯甲酸、咖啡酸、香草酸、丁香酸、金丝桃苷、阿魏酸、苯甲酸、芫花素、芹菜素、山柰酚、异鼠李素、橙皮素、槲皮素、芦丁和异槲皮苷对照品适量，加甲醇溶解，配成混合对照品溶液；精密吸取上述混合对照品适量，稀释成系列不同质量浓度的混合对照品溶液，以各对照品峰面积为纵坐标(Y)，质量浓度为横坐标(X)，考察线性关系。对照品溶液均在4℃条件下贮存，备用；步骤(2)供试品溶液的制备取益母草，粉碎，取益母草粉末1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇，密塞，称定质量，超声提取，放冷，用乙醇补足减失的质量，摇匀，离心取上清液滤过，取续滤液作为供试品溶液；步骤(3)线性回归方程的建立取步骤(1)的混合对照品溶液依次稀释1、2、3、4和5倍，得到系列浓度的混合对照品溶液，依次注入UPLC-/MS2，以系列对照品浓度作为横坐标X，对应的峰面积为纵坐标Y，对各化学成分进行线性回归分析并，计算线性回归方程；步骤(4)含量测定取步骤(2)的益母草供试品溶液注入UPLC-/MS2进行分析，将峰面积代入步骤(3)的线性回归方程，计算供试品溶液中24种成分的含量。 2.根据权利要求1所述的益母草质量检测方法，其特征在于，步骤(1)混合对照品溶液的制备方法为：精密称取对照品盐酸益母草碱、盐酸水苏碱、汉黄芩素、山柰酚-3-O-芸香糖苷、毛蕊花糖苷、葫芦巴碱、益母草苷、红景天苷、绿原酸、对羟基苯甲酸、咖啡酸、香草酸、丁香酸、金丝桃苷、阿魏酸、苯甲酸、芫花素、芹菜素、山柰酚、异鼠李素、橙皮素、槲皮素、芦丁和异槲皮苷对照品适量。加甲醇溶解，配成质量浓度分别为0.85mg·L-1、1.00mg·L-1、1.00mg·L-1、1.00mg·L-1、1.25mg·L-1、1.10mg·L-1、1.50mg·L-1、1.10mg·L-1、1.00mg·L-1、1.10mg·L-1、1.30mg·L-1、1.30mg·L-1、1.10mg·L-1、1.10mg·L-1、1.15mg·L-1、1.30mg·L-1、0.25mg·L-1、0.35mg·L-1、1.35mg·L-1、0.30mg·L-1、1.25mg·L-1、1.10mg·L-1、1.30mg·L-1和1.45mg·L-1的混合对照溶液。 3.根据权利要求1所述的益母草质量检测方法，其特征在于，步骤(2)供试品溶液的制备方法为取益母草，粉碎，取益母草粉末2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50mL，密塞，称定质量，600W超声提取30min，放冷，用乙醇补足减失的质量，摇匀，10000rpm离心10min，取上清液，经0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。 4.根据权利要求1所述的益母草质量检测方法，其特征在于，步骤(3)和步骤(4)中的UPLC-/MS2的色谱条件为：采用Waters Acquity UPLC BEH C18(2.1mm×100mm,1.7μm)色谱柱，以0.1％冰醋酸水溶液为A相-以乙腈为B相，梯度洗脱如下。流速0.40mL·min-1；柱温35℃；进样体积2.0μL。 5.根据权利要求4所述的益母草质量检测方法，其特征在于，梯度洗脱方式为：0–2.0min，10–28％B；2.0–6.0min28–55％B；6.0–7.5min，55–78％B；7.5–8.5min，78–20％B；8.5–10.0min，20–10％B。 6.根据权利要求5所述的益母草质量检测方法，其特征在于，步骤(3)和步骤(4)质谱条件为：离子化模式采用ESI+/ESI-；检测方式为多反应检测模式；脱溶剂气温度：550℃；离子源温度：150℃；毛细管电压：5.0kV。碰撞气流量0.15mL·min-1；脱溶剂气流量1000L·h-1；锥孔气流量：50L·h-1。 7.根据权利要求6所述的益母草质量检测方法，其特征在于，24种化学成分的色谱、质谱参数如下： 8.根据权利要求1所述的益母草质量检测方法，其特征在于，步骤(3)中24种化学成分的线性回归方程如下表：对照品回归方程 R2 线性范围/(ng·ml-1) 葫芦巴碱 y＝1280.66x+53686.70 0.9961 47.20-48333.33 盐酸水苏碱 y＝779.35x-3331.35 0.9957 162.76-333333.33 益母草苷 y＝17.38x+969.35 0.9953 2.01-2055.43 红景天苷 y＝190.81x-232.59 0.9983 1.40-720.80 绿原酸 y＝931.02x+816.18 0.9975 1.31-1357.14 对羟基苯甲酸 y＝2065.67x+14637.78 0.9952 0.38-387.74 咖啡酸 y＝3865.79x+8931.81 0.9978 0.43-444.10 香草酸 y＝133.02x-8073.73 0.9960 65.74-7135.42 丁香酸 y＝80.07x-9726.09 0.9961 181.36-185714.28 芦丁 y＝2359.32x-140049 0.9963 60.20-53750 异槲皮苷 y＝7731.67x+52409.90 0.9982 3.61-3403.27 金丝桃苷 y＝7603.24x+40292.90 0.9961 1.48-6101.19 毛蕊花糖苷 y＝1309.88x-2712.31 0.9982 1.56-1599.40 山奈酚-3-O-芸香糖苷 y＝168.44x+8840.62 0.9964 0.09-149.48 阿魏酸 y＝1353.01x-3655.74 0.9989 1.41-1441.59 苯甲酸 y＝42.83x-1733.93 0.9952 1.68-1718.75 芫花素 y＝249.83x+1279.29 0.9959 0.34-343.88 芹菜素 y＝284x+1111.03 0.9966 0.11-189.01 山奈酚 y＝94.80x+1950.55 0.9970 1.65-423.17 异鼠李素 y＝534.19x-1605.05 0.9967 2.17-278.17 橙皮素 y＝1649.40x+3507.88 0.9992 0.81-813.80 汉黄芩素 y＝797.42x-980.31 0.9980 1.34-86.03 盐酸益母草碱 y＝15.58x+4481.10 0.9990 138.35-35416.67 槲皮素 y＝36.14x-11417 0.9993 328.28-7812.5 。
所属类别：	发明专利