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原文传递基于电化学交流阻抗检测miRNA-21的方法

专利名称：	基于电化学交流阻抗检测miRNA-21的方法
摘要：	本发明公开了一种基于电化学交流阻抗检测miRNA‑21的方法，包括：步骤一、金电极打磨、抛光、干燥；步骤二、将金电极表面浸泡于miRNA‑21适配体溶液，再依次进行电子束照射，葡萄糖水溶液浸泡，冲洗吹干；置于磁场中浸泡，冲洗吹干；滴加巯基乙醇溶液反应，冲洗吹干，得活化金电极；步骤三、制备多个活化金电极，滴加不同浓度的miRNA‑21溶液，反应后冲洗吹干，得到多个检测金电极；步骤四、检测每个浓度的miRNA‑21溶液对应的阻抗值；步骤五、计算得到阻抗值的差值与浓度的线性关系；步骤六、检测待测样液的阻抗值，采用线性关系计算得到待测样液中miRNA‑21的浓度。本发明具有检测灵敏度高的有益效果。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广西;45
申请人：	广西师范学院
发明人：	肖琦;黄珊;李家文;金晓宇
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-07T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-07T00:00:00+0800
申请号：	CN201910172770.7
公开号：	CN109856217A
代理机构：	北京远大卓悦知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	靳浩
分类号：	G01N27/327(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	530001 广西壮族自治区南宁市西乡塘区明秀东路175号
主权项：	1.基于电化学交流阻抗检测miRNA-21的方法，其特征在于，包括：步骤一、将金电极进行打磨、抛光、洗涤干燥；步骤二、金电极活化处理： a、将步骤一中的金电极表面浸泡于浓度为2μM的miRNA-21适配体溶液中1min，然后采用强度为15kGy的电子束照射3min，再浸泡于温度度为4℃，浓度为10μM的葡萄糖水溶液中4h，再用PH为6.8的PBS溶液冲洗30s，用氮气吹干； b、用PH为6.8的PBS溶液浸泡步骤a处理后的金电极表面，并在浸泡的同时置于磁场强度为1T的磁场中，5min后取出，用浓度为5μM的硼酸的乙醇溶液冲洗15min，然后再用PH为6.8的PBS溶液冲洗30s，用氮气吹干； c、用浓度为1mM的巯基乙醇溶液滴加到步骤b处理的金电极表面，直至金电极表面布满巯基乙醇溶液，置于4℃环境中反应1h，然后用PH为6.8的PBS溶液冲洗30s，用氮气吹干，得到活化金电极；步骤三、重复步骤一和步骤二制备多个活化金电极，分别向多个活化金电极表面滴加不同浓度的miRNA-21溶液，置于37℃环境中60min，再用PH为6.8的PBS溶液冲洗30s，用氮气吹干，得到多个检测金电极；步骤四、以银氯化银电极和铂电极分别为参比电极和对电极，以步骤三中的检测金电极为工作电极，搭建多个三电极体系，采用交流阻抗法扫描得到多个交流阻抗曲线图，根据交流阻抗曲线图拟合得到每个浓度的miRNA-21溶液对应的阻抗值；步骤五、以浓度不为0的miRNA-21溶液的阻抗值减去浓度为0的miRNA-21溶液的阻抗值的差值为纵坐标，以miRNA-21溶液的浓度为横坐标，计算得到miRNA-21溶液的阻抗值的差值与浓度的线性关系；步骤六、按照步骤一和步骤二制备活化金电极，向该活化金电极表面滴加10μL含有未知浓度的miRNA-21的待测样液，置于37℃环境中60min，再用PH为6.8的PBS溶液冲洗30s，用氮气吹干，得到检测金电极；步骤七、以银氯化银电极和铂电极分别为参比电极和对电极，以步骤六中的检测金电极为工作电极，搭建三电极体系，采用交流阻抗法扫描得到一个交流阻抗曲线图，根据交流阻抗曲线图拟合得到待测样液对应的阻抗值，以该阻抗值减去浓度为0的miRNA-21溶液的阻抗值，得到差值，将该差值代入步骤五中的线性关系，计算得到待测样液中miRNA-21的浓度。 2.如权利要求1所述的基于电化学交流阻抗检测miRNA-21的方法，其特征在于，步骤一具体为：将金电极表面置于NaHCO3浓度为5μM、KCl浓度为10μM的超纯水溶液中，于温度为65℃水浴条件下浸泡40min，用超纯水冲洗后，再置于乙酸浓度为5μM、硅酸浓度为2μM的超纯水溶液中，于温度为80℃水浴条件下浸泡60min，用超纯水冲洗后，在抛光布上用0.05μm的抛光粉打磨，再用超纯水冲洗干净。 3.如权利要求1所述的基于电化学交流阻抗检测miRNA-21的方法，其特征在于，步骤三中的miRNA-21溶液的浓度分别为0mol/L、2×10-12mol/L、5×10-12mol/L、1×10-11mol/L、2×10-11mol/L，滴加到活化金电极表面的体积为10μL。 4.如权利要求1所述的基于电化学交流阻抗检测miRNA-21的方法，其特征在于，miRNA-21的核苷酸序列为：5'-UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA-3'；miRNA-21适配体的核苷酸序列为5'-TCAACATCAGTCTGATAAGCTATTT-(CH2)6-SH-3'。 5.如权利要求1所述的基于电化学交流阻抗检测miRNA-21的方法，其特征在于，步骤a中的葡萄糖水溶液的配置方法为：将超纯水置于-10℃下冷冻30min，加入乙酸，使乙酸浓度为1μM，置于4℃环境中静置10min，再置于-10℃下冷冻10min，加入葡萄糖，置于4℃温度条件下，超声频率为80KHz，超声处理10min。 6.如权利要求1所述的基于电化学交流阻抗检测miRNA-21的方法，其特征在于，步骤四和步骤七中扫描参数设置为：振幅为0.005V，频率为0.1～1000Hz的条件下，在反应介质液为含有[Fe(CN)6]3-和Fe(CN)64-的溶液中进行检测，其中，[Fe(CN)6]3-和Fe(CN)64-的总浓度为5mmol。
所属类别：	发明专利