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原文传递基于血糖仪的DNA凝胶检测miRNA-21的方法

专利名称：	基于血糖仪的DNA凝胶检测miRNA-21的方法
摘要：	本发明公开了一种基于血糖仪的DNA凝胶检测miRNA‑21的方法，具体按照以下步骤进行：步骤S1、DNA聚合链PS‑Ⅰ和DNA聚合链PS‑Ⅱ的合成；步骤S2、用步骤S1制备DNA聚合链PS‑Ⅰ和DNA聚合链PS‑Ⅱ进行封装淀粉酶的DNA凝胶的制备；步骤S3、用血糖仪对miRNA‑21进行测定。本发明解决了易于操作的血糖仪能够可实时测定miRNA‑21含量的问题，实现了公众对于待测物miRNA‑21的检测需求。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖南;43
申请人：	湖南大学
发明人：	李继山;司艳美;王宁宁
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-12T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-09T00:00:00+0800
申请号：	CN201910294545.0
公开号：	CN109991421A
代理机构：	长沙新裕知识产权代理有限公司
代理人：	周跃仁
分类号：	G01N33/66(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	410082 湖南省长沙市岳麓区麓山南路麓山门
主权项：	1.基于血糖仪的DNA凝胶检测miRNA-21的方法，其特征在于，具体按照以下步骤进行：步骤S1、DNA聚合链PS-Ⅰ和DNA聚合链PS-Ⅱ的合成；步骤S2、用步骤S1制备DNA聚合链PS-Ⅰ和DNA聚合链PS-Ⅱ进行封装淀粉酶的DNA凝胶的制备；步骤S3、用血糖仪对miRNA-21进行测定。 2.根据权利要求1所述的基于血糖仪的DNA凝胶检测miRNA-21的方法，其特征在于，所述步骤S1将质量分数为25％的丙烯酰胺水溶液与缓冲溶液混合，然后加入到3mM的丙烯酰胺标记的Strands-Ⅰ水溶液中，将混合溶液在真空干燥器中脱气10min，加入质量分数为5％的过硫酸铵水溶液和质量分数为5％的N,N,N',N'-四甲基乙二胺水溶液，继续脱气18min，得到DNA聚合链PS-Ⅰ，并置于4℃保存； Strands-Ⅰ的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；将质量分数为25％的丙烯酰胺水溶液与缓冲溶液混合，然后加入到3mM的丙烯酰胺标记的Strands-Ⅱ水溶液中，将混合溶液在真空干燥器中脱气10min，加入质量分数为5％的过硫酸铵水溶液、质量分数为5％的N,N,N',N'-四甲基乙二胺水溶液，继续脱气18min，得到DNA聚合链PS-Ⅱ，并置于4℃保存； Strands-Ⅱ的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。 3.根据权利要求2所述的基于血糖仪的DNA凝胶检测miRNA-21的方法，其特征在于，所述步骤S2具体按照以下步骤进行：将具有DNAzyme切割位点的Substrate-link与EA-21和EB-21混合形成混合液，37℃温育30min，取混合液加入到含有DNA聚合链PS-Ⅰ、DNA聚合链PS-Ⅱ和0.4μg/μL淀粉酶的离心管中形成水凝胶，使得Strands-Ⅰ、Strands-Ⅱ和具有DNAzyme切割位点的Substrate-link的物质的量比为1:1:1； DNAzyme的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；具有DNAzyme切割位点的Substrate-link的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示。 4.根据权利要求3所述的基于血糖仪的DNA凝胶检测miRNA-21的方法，其特征在于，所述步骤S3将含有4-6μM的Pb2+和不同浓度miRNA-21的溶液加入到步骤S2制备的含有水凝胶的离心管中，在37℃条件下反应4h，将14μg/μL的淀粉水溶液加入，37℃继续反应2h，取上清液，使用血糖仪对上清液中的葡萄糖含量进行检测，得到不同浓度miRNA-21相对应的葡萄糖含量，从而根据葡萄糖含量来确定miRNA-21的浓度。 5.根据权利要求3所述的基于血糖仪的DNA凝胶检测miRNA-21的方法，其特征在于，所述步骤S3中EA-21的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示； EB-21的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。 6.根据权利要求4所述的基于血糖仪的DNA凝胶检测miRNA-21的方法，其特征在于，所述miRNA-21的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。 7.根据权利要求2所述的基于血糖仪的DNA凝胶检测miRNA-21的方法，其特征在于，所述质量分数为25％的丙烯酰胺水溶液：缓冲溶液：3mM的丙烯酰胺标记的Strands-Ⅰ：质量分数为5％的过硫酸铵水溶液：质量分数为5％的N,N,N',N'-四甲基乙二胺水溶液的体积比为4:12:8:1:1；质量分数为25％的丙烯酰胺水溶液：缓冲溶液：3mM的丙烯酰胺标记的Strands-Ⅱ：质量分数为5％的过硫酸铵水溶液：质量分数为5％的N,N,N',N'-四甲基乙二胺水溶液的体积比为4:12:8:1:1；缓冲溶液pH为7.3，缓冲溶液中Na+的浓度和Cl-的浓度为100-150mM。 8.根据权利要求5所述的基于血糖仪的DNA凝胶检测miRNA-21的方法，其特征在于，所述EA-21、EB-21的物质的量相等均为具有DNAzyme切割位点的Substrate-link的物质的量的十分之一；具有DNAzyme切割位点的Substrate-link与EA-21和EB-21混合形成混合液的体积与含有DNA聚合链PS-Ⅰ、DNA聚合链PS-Ⅱ和0.4μg/μL淀粉酶的体积相等。 9.根据权利要求6所述的基于血糖仪的DNA凝胶检测miRNA-21的方法，其特征在于，所述步骤S2制备的水凝胶溶液：含有4-6μM的Pb2+和miRNA-21的溶液：淀粉水溶液的体积比为6:1:4。
所属类别：	发明专利