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原文传递一种同时检测Exo I和TdT的电化学生物传感器的制备方法及其应用

专利名称：	一种同时检测Exo I和TdT的电化学生物传感器的制备方法及其应用
摘要：	本发明公开了一种同时检测Exo I和TdT的电化学生物传感器的制备方法。巯基DNA通过疏基与金电极表面自发形成Au‑S共价键而被固定于金电极表面。随后，TdT催化巯基DNA的3’‑OH末端与三磷酸脱氧胞嘧啶核苷酸(dCTP)聚合，生成的富C DNA长链可用来形成AgNCs，通过Ag的溶出伏安信号来检测TdT活性。TdT聚合作用前，引入Exo I，可以水解巯基DNA，从而最终影响AgNCs的形成，基于此可以检测ExoI活性。改变ExoI或TdT浓度会影响电化学信号的大小，利用此原理制备了一种高效的用于同时检测Exo I和TdT的电化学生物传感器。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	宁波大学
发明人：	胡宇芳;胡丹丹;张青青;马少华;王邃;郭智勇
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-21T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-07T00:00:00+0800
申请号：	CN201910096485.1
公开号：	CN109856211A
分类号：	G01N27/327(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	315211 浙江省宁波市江北区风华路818号宁波大学
主权项：	1.一种同时检测Exo I和TdT的电化学生物传感器的制备方法及其应用，其特征在于，具体机理如下：巯基DNA与金电极表面自发形成Au-S共价键而被固定于金电极表面。随后，TdT催化巯基DNA的3’-OH末端与三磷酸脱氧胞嘧啶核苷酸(dCTP)聚合，生成的富C DNA长链可用来形成AgNCs，通过Ag的溶出伏安信号来检测TdT活性。若TdT聚合作用前，引入Exo I，可以水解巯基DNA，从而最终影响AgNCs的形成，基于此可以检测Exo I活性。改变Exo I或TdT浓度会影响电化学信号的大小。 2.一种同时检测Exo I和TdT的电化学生物传感器的制备方法，其特征在于，具体包括如下步骤： (1)传感器的制备 Electrode 1的制备：首先将金电极(直径为2mm)在麂皮上用三氧化二铝粉末抛光5～10min，抛光后将电极置于超声清洗器中用二次蒸馏水中超声清洗5～10min，然后用N2吹干，标记为Electrode1。 Electrode 2的制备：取巯基DNA溶液(2.5～15.0μL，5～10μM)，滴涂于Electrode 1表面，在4℃冰箱孵育过夜，蒸馏水缓缓冲洗电极，采用1.0～2.0mM巯基己醇(MCH)处理30～50min，置换电极表面非Au-S键固定的巯基DNA，蒸馏水缓缓冲洗电极，标记为Electrode 2。 Electrode 3的制备：于Electrode 2电极表面，滴加2～10μL TdT反应液(组成为：1～5μL 5×TdT缓冲液，dCTP(1～3μL，5～10mM)，TdT(0.1～3μL，0.01～100U/mL)，加H2O至总体积为2～10μL)，在32～40℃下放置1～3h，蒸馏水缓缓冲洗电极，标记为Electrode 3。 Electrode 4的制备：向Electrode 3电极表面滴加Ag+(2.5～5.0μL，1～2μM)，室温孵育15～20min，蒸馏水缓缓冲洗电极。再向电极表面滴加硼氢化钠溶液(NaBH4，2.5～5.0μL，1～2μM)，室温下避光反应15～20min，蒸馏水缓缓冲洗电极，标记为Electrode 4。 (2)一种同时检测Exo I和TdT的电化学生物传感器的应用在Electrode 3制备过程中，使用TdT延长前，引入Exo I溶液(终浓度为0～1000U/mL)，37℃下孵育30～60min，用于传感器制备，然后如(1)步骤，制备一系列传感器，用来检测不同浓度Exo I的电化学响应。在Electrode 3制备过程中，改变TdT浓度(终浓度为0.01～10U/mL)，用于传感器制备，然后如(1)步骤，制备一系列传感器，用来检测不同浓度TdT的电化学响应。 3.根据权利要求1所述机理及权利要求2所述传感器制备，其特征在于：用来检测Exo I和TdT的电化学方法为方波伏安法，电位范围为0～0.3V，振幅为25mV。 4.根据权利要求1-3中所述制得的电化学生物传感器，可以实现不同浓度Exo I和TdT的检测及其小分子抑制剂的筛选，Exo I检测限为0.05U/mL，抑制剂的IC50为0.60mM；TdT检测限低至0.0003U/mL，抑制剂的IC50为1.26mM。
所属类别：	发明专利