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原文传递一种启脾丸的鉴别方法

专利名称：	一种启脾丸的鉴别方法
摘要：	本发明公开了一种启脾丸的鉴别方法，该方法包括以下内容：（1）在显微镜下观察启脾丸的表面性状；（2）用薄层色谱法鉴别白术成分；（3）用薄层色谱法鉴别陈皮成分；（4）采用高效液相色谱‑质谱法鉴别泽泻成分；（5）采用高效液相色谱‑质谱法鉴别六神曲成分。本发明的方法修订了山楂的显微特征，增加了白术、炒麦芽和泽泻的显微特征，完善了启脾丸成分的显微特征；对白术和陈皮的薄层色谱法进行了改进，解决了现有方法中，白术经显色后斑点不清晰且Rf值较大的问题以及陈皮极易出现拖尾或Rf值与对照品不一致的现象；采用高效液相色谱‑质谱法鉴别泽泻、六神曲成分，灵敏度和准确性较高。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广西;45
申请人：	广西壮族自治区食品药品检验所
发明人：	张涛;罗轶;何颂华;燕霞;罗永强;朱韬;林敬开;朱雪妍
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-30T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-14T00:00:00+0800
申请号：	CN201910093631.5
公开号：	CN109884238A
代理机构：	南宁市来来专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	来光业
分类号：	G01N30/90(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	530021 广西壮族自治区南宁市青秀区青湖路9号
主权项：	1.一种启脾丸的鉴别方法，其特征在于，所述方法包括以下内容：（1）在显微镜下观察启脾丸的表面性状；（2）用薄层色谱法鉴别白术成分；（3）用薄层色谱法鉴别陈皮成分；（4）采用高效液相色谱-质谱法鉴别泽泻成分；（5）采用高效液相色谱-质谱法鉴别六神曲成分。 2.根据权利要求1所述启脾丸的鉴别方法，其特征在于，在显微镜下观察启脾丸的表面性状，观察结果如下：（1）茯苓：不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛试液溶化；菌丝无色或淡棕色，直径4～6µm；（2）人参：草酸钙簇晶直径20～68µm，棱角锐尖；（3）山药：草酸钙针晶束存在于黏液细胞中，长80～240µm，针晶直径2～8µm；（4）陈皮：草酸钙方晶成片存在于薄壁组织中；（5）甘草：纤维束周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；（6）山楂：果皮石细胞单个散在或成群，无色或淡黄色，类多角形、长圆形或不规则形，直径19～125μm，壁厚，孔沟及层纹明显，有的胞腔内含深棕色物；（7）白术：草酸钙针晶细小，长10～32μm，存在于薄壁细胞中；（8）炒麦芽：稃片外表皮表面观长细胞与2个短细胞交互排列；长细胞壁厚，紧密深波状弯曲，短细胞类圆形，有稀疏壁孔；（9）泽泻：薄壁细胞类圆形，具多数椭圆形纹孔，集成纹孔群。 3.根据权利要求1所述启脾丸的鉴别方法，其特征在于，用薄层色谱法鉴别白术成分，具体内容如下：（1）取启脾丸样品9g，置挥发油提取器中，加水100mL连接挥发油提取器，自测定器上端加水至充满测定器的刻度部分并刚好溢流入烧瓶，再加入乙酸乙酯3mL，加热回流3小时，放冷，分离取乙酸乙酯层，作为供试品溶液；（2）取白术对照药材0.5g，置挥发油提取器中，加水100mL连接挥发油提取器，自测定器上端加水至充满测定器的刻度部分并刚好溢流入烧瓶，再加入乙酸乙酯3mL，加热回流3小时，放冷，分离取乙酸乙酯层，即得对照药材溶液；（3）吸取供试品溶液和对照药材溶液各10μL，分别点于同一硅胶G板上，以石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸显色剂，置日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显有一桃红色主斑点。 4.根据权利要求1所述启脾丸的鉴别方法，其特征在于，用薄层色谱法鉴别陈皮成分，具体内容如下：（1）取启脾丸样品6g，剪碎，加70%乙醇20mL，加热回流1小时，滤过，滤液加在聚酰胺柱上，先用80mL水洗脱，弃去水洗液，再用70%乙醇100mL洗脱，收集乙醇洗脱液，回收溶剂至干，残渣加甲醇10mL使溶解，作为供试品溶液；（2）取陈皮对照药材1g，剪碎，加70%乙醇20mL，加热回流1小时，滤过，滤液加在聚酰胺柱上，先用80mL水洗脱，弃去水洗液，再用70%乙醇100mL洗脱，收集乙醇洗脱液，回收溶剂至干，残渣加甲醇10mL使溶解，得到对照药材溶液；（3）取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；（4）吸取供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为32：17：5的三氯甲烷-甲醇-水溶液的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 5.根据权利要求3和4所述启脾丸的鉴别方法，其特征在于，所述薄层色谱鉴别还包括进行耐用性实验考察和制备阴性样品溶液进行方法学验证。 6.根据权利要求1所述启脾丸的鉴别方法，其特征在于，采用高效液相色谱-质谱法鉴别泽泻成分，具体内容如下：（1）色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.1%甲酸为流动相A，甲醇为流动相B，进行梯度洗脱15分钟；流速为每分钟0.5mL；（2）质谱条件：采用质谱检测器，电喷雾正离子模式（ESI+），进行多反应检测（MRM），选择质荷比m/z555.4→495.3作为24-乙酰泽泻醇A检测离子对，选择质荷比m/z537.4→491.2和质荷比m/z537.4→105.1作为23-乙酰泽泻醇B检测离子对，选择质荷比551.4→477.3和质荷比m/z551.4→57.1作为23-乙酰泽泻醇C检测离子对，取对照品溶液，进样2μL，上述检测离子对的MRM色谱峰的信噪比均应大于3:1；（3）供试品溶液制备：取启脾丸样品剪碎，混匀，取2g，加硅藻土1g，研匀，加甲醇50 mL，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至5mL，滤过，取续滤液，即得；（4）对照品溶液制备：取24-乙酰泽泻醇A、23-乙酰泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇C对照品，加甲醇制成每1mL含各对照品各1μg的混合标准溶液，作为对照品溶液；（5）测定：吸取对照品溶液和供试品溶液各2μL，注入高效液相色谱-串联质谱联用仪，测定；（6）结果判定：以质荷比m/z555.4→495.3离子对提取的供试品离子流色谱中，应出现与24-乙酰泽泻醇A对照品色谱保留时间一致的色谱峰；以质荷比m/z537.4→491.2和质荷比m/z537.4→105.1离子对提取的供试品离子流色谱中，应出现与23-乙酰泽泻醇B对照品色谱保留时间一致的色谱峰；以质荷比m/z551.4→477.3和质荷比m/z551.4→57.1离子对提取的供试品离子流色谱中，应出现与23-乙酰泽泻醇C对照品色谱保留时间一致的色谱峰。 7.根据权利要求1所述启脾丸的鉴别方法，其特征在于，采用高效液相色谱-质谱法鉴别六神曲成分，具体内容如下：（1）色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.1%甲酸为流动相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱17分钟；流速为每分钟0.5mL；（2）质谱条件：采用质谱检测器，电喷雾正离子模式（ESI+），进行多反应检测（MRM），选择质荷比m/z475.2→325.2、质荷比m/z475.2→163.1和质荷比m/z475.2→145.0作为苦杏仁苷检测离子对；取对照品溶液，进样2μL，上述检测离子对的MRM色谱峰的信噪比均应大于3:1；（3）取苦杏仁苷对照品，加甲醇制成浓度为0.1μg/mL的溶液，作为对照品溶液；（4）取样品剪碎，混匀，取2g，加硅藻土1g，研匀，加甲醇50 mL，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至5mL，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；（5）吸取对照品溶液和供试品溶液各2μL，注入高效液相色谱-串联质谱联用仪，测定；（6）结果判定：以质荷比m/z475.2→325.2、质荷比m/z475.2→163.1和质荷比m/z475.2→145.0离子对提取的供试品离子流色谱中，应出现与苦杏仁苷对照品色谱保留时间一致的色谱峰。
所属类别：	发明专利