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原文传递一种快速检测溶菌酶的分子印迹光子晶体膜及其制备方法和应用

专利名称：	一种快速检测溶菌酶的分子印迹光子晶体膜及其制备方法和应用
摘要：	本发明涉及一种溶菌酶分子印迹光子晶体膜，属于材料化学和分析检测领域。本发明将二氧化硅光子晶体微球与分子印迹技术结合，制备了具有反蛋白石结构的对三溶菌酶蛋白质分子特异性识别和结合的分子印迹光子晶体膜。随着结合的溶菌酶蛋白质分子数量增加，膜上的大孔结构发生变化，导致制备的分子印迹光子晶体膜的布拉格衍射波长红移。根据制备的分子印迹光子晶体凝胶膜对溶菌酶的光谱响应变化，本发明可以实现对样品中溶菌酶浓度的快速检测。该方法具有高灵敏度和选择性、低检出限的优点，可以作为一种生物传感器用于生物样品中溶菌酶蛋白质分子的快速检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河南;41
申请人：	南阳师范学院
发明人：	张鑫;李彦松;张浩
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-18T00:00:00+0800
申请号：	CN201910073276.5
公开号：	CN109900653A
代理机构：	北京中恒高博知识产权代理有限公司
代理人：	吕玉博
分类号：	G01N21/33(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	473061 河南省南阳市卧龙区卧龙路1638号
主权项：	1.一种快速检测溶菌酶的分子印迹光子晶体膜的制备方法，其特征在于：包括以下步骤： (1)将硅片除杂并清洗，得到亲水化基质； (2)将单分散二氧化硅微球分散到无水乙醇中，形成胶体分散体系，将步骤(1)制备的亲水化基质以一定角度插入二氧化硅微球溶液中，采用垂直自组装的方法，恒温静置至乙醇完全挥发，得到光子晶体模板； (3)将聚甲基丙烯酸甲酯薄膜清洗后覆盖在步骤(2)得到的光子晶体模板上； (4)依次将模板分子、功能单体和交联剂溶于磷酸盐缓冲溶液中，充分混合后得到预聚合溶液； (5)将引发剂和加速剂加入到步骤(4)的预聚合溶液中，分散后得到前驱体溶液；吸取一定量的前驱体溶液注入PMMA薄膜与硅片的缝隙中，直到溶液在毛细管和大气压的作用下充满PMMA和硅片之间的空隙，水浴聚合反应，得到溶菌酶分子印迹光子晶体膜； (6)将步骤(5)制备得到的溶菌酶分子印迹光子晶体膜浸泡于氢氟酸溶液中，去除二氧化硅微球，得到反蛋白石结构的分子印迹光子晶体水凝胶印迹膜； (7)将步骤(6)得到的反蛋白石结构的分子印迹光子晶体水凝胶印迹膜进行洗脱，直到完全除去溶菌酶模板蛋白质，制备得到的分子印迹光子晶体膜。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述单分散二氧化硅微球的粒径为200～400nm；所述胶体分散体系中，单分散二氧化硅微球的质量份数为1.0～5.0％；所述角度为30-90°，所述恒温为在25-40℃下恒温。 3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(4)中，所述模板分子为溶菌酶，功能单体为丙烯酰胺，交联剂为N,N’-亚甲基双丙烯胺；所述模板分子、功能单体和交联剂的重量比为：(10～200mg)：(50～500mg)：(50～500mg)；所述磷酸盐缓冲溶液的pH为6.0～8.0。 4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(5)中，所述水浴聚合反应的条件为30℃水浴反应2.0～10.0小时；所述引发剂为过硫酸铵，加速剂为四甲基乙二胺，引发剂与加速剂的用量比为(5～50mg)：(5～50μL)。 5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(6)中，在质量浓度0.5～5％的氢氟酸溶液中浸泡1～6小时。 6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(7)中，所述洗脱时，洗脱液为十二烷基硫酸钠和乙酸的混合溶液；在混合溶液中，水为溶剂，十二烷基硫酸钠的质量浓度为1～10％，乙酸的体积浓度为1～15％。 7.应用权利要求1-6任一项的方法制备得到的分子印迹光子晶体膜。 8.权利要求7所述的分子印迹光子晶体膜在快速检测溶菌酶中的应用。 9.一种快速检测溶菌酶含量的方法，其特征在于：包括以下步骤： (1)将权利要求1-6任一项制备得到的分子印迹光子晶体膜分别放入不同浓度的溶菌酶标准溶液中，使其吸附饱和，取出分子印迹光子晶体膜，分别测定其紫外吸收光谱，计算得到吸收峰位移量-溶菌酶浓度变化曲线； (2)将权利要求1-6任一项制备得到的分子印迹光子晶体膜加入到待测样品中，通过测定溶菌酶分子印迹光子晶体膜的衍射峰波长变化，代入第一步得到的标准变化曲线，即可得到待测溶液中溶菌酶的含量。 10.一种快速定性检测待测溶液中是否含有溶菌酶的方法，其特征在于：是将权利要求1-6任一项制备得到的分子印迹光子晶体膜加入到待测样品中，使其吸附饱和，若在自然光下发生明显的红移，则待测溶液中含有溶菌酶，且含量大于0.5μmol/L。
所属类别：	发明专利