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原文传递一种石蜡切片免疫组化套染PAS试剂盒及其染色方法和应用

专利名称：	一种石蜡切片免疫组化套染PAS试剂盒及其染色方法和应用
摘要：	本发明公开了一种石蜡切片免疫组化套染PAS试剂盒及其染色方法和应用，该试剂盒包括如下组分：二甲苯、无水乙醇、PBS缓冲液、柠檬酸抗原修复液、胰酶、内源性过氧化物酶阻断剂、兔抗人IgG多克隆抗体、兔抗人IgA多克隆抗体、酶标羊抗兔第二抗体、DAB显色剂、过碘酸、硫酸、PAS染液、苏木素染色液、盐酸酒精，氨水酒精。本发明的试剂盒染色过程中简便快捷，可以用于在同一张切片上染色显示肾组织结构、免疫复合物沉积方式和部位。本发明的石蜡切片免疫组化套染PAS减少组织制备过程，染色步骤少，实验时间缩短，稳定性高，实验结果直观对比，所提供的信息量远远比传统单染高等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	东南大学
发明人：	弓玉祥;陈平圣;鲁荐
专利状态：	有效
申请日期：	2019-02-28T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-28T00:00:00+0800
申请号：	CN201910155479.9
公开号：	CN109946139A
代理机构：	南京苏高专利商标事务所(普通合伙)
代理人：	孙斌
分类号：	G01N1/30(2006.01);G;G01;G01N;G01N1
申请人地址：	211102 江苏省南京市江宁区东南大学路2号
主权项：	1.一种石蜡切片免疫组化套染PAS试剂盒，其特征在于，包括如下组分：二甲苯、无水乙醇、PBS缓冲液、柠檬酸抗原修复液、胰酶、内源性过氧化物酶阻断剂、兔抗人IgG多克隆抗体、兔抗人IgA多克隆抗体、酶标羊抗兔第二抗体、DAB显色剂、过碘酸、硫酸、PAS染液、苏木素染色液、盐酸酒精、氨水酒精。 2.一种利用权利要求1所述的石蜡切片免疫组化套染PAS试剂盒的染色方法，其特征在于，包括如下步骤： (1)脱蜡至水：将组织制成石蜡切片，石蜡切片浸泡于二甲苯脱蜡缸中进行脱蜡，然后将切片浸泡在乙醇中； (2)微波热修复抗原：将步骤(1)浸泡后的切片浸泡于柠檬酸抗原修复液中，微波加热，然后将切片取出，自然冷却至室温； (3)抗原修复：将切片上组织滴加胰酶，孵育后，进一步暴露抗原，再用PBS冲洗； (4)内源性过氧化物酶阻断：冲洗后切片上每个组织滴加内源性过氧化物酶阻断剂室温孵育，再用PBS冲洗； (5)孵育IgA或IgG第一抗体：冲洗后切片上组织滴加兔抗人IgA多克隆抗体或兔抗人IgG多克隆抗体，孵育，再用PBS冲洗； (6)孵育酶标羊抗兔第二抗体：冲洗后切片上组织滴加酶标羊抗兔第二抗体室温孵育，再用PBS冲洗； (7)DAB显色：切片上组织滴加DAB显色剂，自来水冲洗； (8)PAS染色：加入过碘酸后自来水洗，自来水浸泡后，切片上组织滴加PAS染液，再用自来水洗； (9)苏木素显色：切片上组织滴加苏木素染色液后，自来水洗，再加入盐酸酒精，自来水洗，再加入氨水酒精，自来水洗； (10)用乙醇梯度脱水，直至二甲苯透明，封片。 3.根据权利要求2所述的石蜡切片免疫组化套染PAS试剂盒的染色方法，其特征在于，步骤(1)所述蜡切片浸泡于二甲苯脱蜡缸中优选进行脱蜡4-6次，每次20-25分钟。 4.根据权利要求2所述的石蜡切片免疫组化套染PAS试剂盒的染色方法，其特征在于，步骤(1)所述切片浸泡在乙醇中为依次浸泡在体积分数为100％、100％、95％、95％、80％、80％的乙醇中，每次5-6min。 5.根据权利要求2所述的石蜡切片免疫组化套染PAS试剂盒的染色方法，其特征在于，步骤(8)所述PAS染液，再用自来水洗后再用浸泡蒸馏水中，在接着H2SO4中浸泡，水洗。 6.根据权利要求2所述的石蜡切片免疫组化套染PAS试剂盒的染色方法，其特征在于，步骤(10)所述用乙醇梯度脱水为依次使用体积分数为80％、80％、95％、95％、100％、100％的乙醇梯度脱水，直至二甲苯透明。 7.一种权利要求1所述的石蜡切片免疫组化套染PAS试剂盒的染色方法在组织染色中的应用。 8.根据权利要求7的应用，其特征在于，所述蜡切片免疫组化套染PAS试剂盒的染色方法在肾脏组织染色中的应用。
所属类别：	发明专利