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原文传递检测多奈哌齐血药浓度的方法

专利名称：	检测多奈哌齐血药浓度的方法
摘要：	本发明提供一种检测多奈哌齐血药浓度的方法：取待测血液，离心，获得血浆；向血浆中加入二甲基亚砜、震荡，再加入三氯乙酸溶液沉淀蛋白、震荡，离心，收集上清液；取上清液，加入三乙胺‑磷酸溶液，震荡，获得待测液；取不含有多奈哌齐的对照血液，离心，获得血浆；向血浆中加入多奈哌齐二甲基亚砜溶液、震荡，再加入三氯乙酸溶液沉淀蛋白、震荡，离心，收集上清液；取上清液，加入三乙胺‑磷酸溶液，震荡，制备含多奈哌齐浓度梯度的参比液；依次将待测液、含多奈哌齐浓度梯度的参比液加入微流控芯片的样品池中，采用非接触电导法检测。本发明方法，具有较好的电泳分离检测多奈哌齐的重现性及实用性。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	南方医科大学珠江医院
发明人：	杨秀娟;李智磊;陈缵光;王勇
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-10T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-28T00:00:00+0800
申请号：	CN201910284524.0
公开号：	CN109946364A
代理机构：	广州华进联合专利商标代理有限公司
代理人：	向薇;万志香
分类号：	G01N27/447(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	510280 广东省广州市工业大道中253号
主权项：	1.一种检测多奈哌齐血药浓度的方法，其特征在于，所述的方法包括： (1)待测液制备：取待测血液，离心，获得血浆；向所述血浆中加入二甲基亚砜溶液、震荡，再加入三氯乙酸溶液沉淀蛋白、震荡，离心，收集上清液；取所述上清液，加入三乙胺溶液、磷酸溶液，震荡，获得待测液； (2)参比液制备：取不含有多奈哌齐的对照血液，离心，获得血浆；向所述血浆中加入含多奈哌齐的二甲基亚砜溶液，震荡，再加入三氯乙酸溶液沉淀蛋白、震荡，离心，收集上清液；取所述上清液，加入三乙胺溶液、磷酸溶液，震荡，制备含多奈哌齐浓度梯度的参比液；所述含多奈哌齐的二甲基亚砜溶液与步骤(1)加入的所述二甲基亚砜溶液体积相等； (3)检测：将所述待测液或所述含多奈哌齐浓度梯度的参比液加入微流控芯片的样品池中，加入含有二甲基亚砜的缓冲溶液，采用非接触电导法检测。 2.根据权利要求1所述的检测多奈哌齐血药浓度的方法，其特征在于，步骤(1)和/或步骤(2)中，所述的上清液、三乙胺溶液、磷酸溶液的体积比为8：(0.1～3)：(0.1～3)，所述的三乙胺溶液的浓度范围为50～150mmol/L，所述磷酸溶液的浓度为50～150mmol/L，加入三氯乙酸溶液沉淀蛋白、震荡后离心所采用的条件为：8000～12000rpm、20～30min；步骤(3)中，所述的缓冲溶液由三乙胺溶液、磷酸溶液组成，其中三乙胺溶液与磷酸溶液的浓度分别为0.9～150mmol/L、0.3～50mmol/L且浓度比值大于等于3；步骤(1)和/或步骤(2)和/或步骤(3)中，所述二甲基亚砜的体积浓度为0.5-5％。 3.根据权利要求2所述的检测多奈哌齐血药浓度的方法，其特征在于，步骤(1)和/或步骤(2)中，所述的上清液、三乙胺溶液、磷酸溶液的体积比为8：(1～2)：(0.3～0.6)，所述的三乙胺溶液的浓度范围为75～125mmol/L，所述磷酸溶液的浓度为75～125mmol/L，加入三氯乙酸溶液沉淀蛋白、震荡后离心所采用的条件为：9000～11000rpm、23～27min；步骤(3)中，所述的缓冲溶液由三乙胺溶液、磷酸溶液组成，其中三乙胺溶液与磷酸溶液的浓度分别为3～30mmol/L、1～10mmol/L且浓度比值大于等于3；步骤(1)和/或步骤(2)和/或步骤(3)中，所述二甲基亚砜的体积浓度为1～3％。 4.根据权利要求3所述的检测多奈哌齐血药浓度的方法，其特征在于，步骤(1)和/或步骤(2)中，所述的上清液、三乙胺溶液、磷酸溶液的体积比为8：1.5：0.5，所述的三乙胺溶液的浓度范围为100mmol/L，所述磷酸溶液的浓度为100mmol/L，加入三氯乙酸溶液沉淀蛋白、震荡后离心所采用的条件为：10000rpm、25min；步骤(3)中，所述的缓冲溶液由三乙胺溶液、磷酸溶液组成，其中三乙胺溶液与磷酸溶液的浓度分别为15mmol/L、5mmol/L；步骤(1)和/或步骤(2)和/或步骤(3)中，所述二甲基亚砜的体积浓度为2％。 5.根据权利要求1至4任一项所述的检测多奈哌齐血药浓度的方法，其特征在于，步骤(3)包括如下步骤： 1)取微流控芯片，加入缓冲液，使所述微流控芯片的样品池、样品废液池、缓冲液储存池、缓冲液废液池、进样通道和分离通道均充满缓冲液； 2)吸去出所述样品池、缓冲液储存池中的所述缓冲液； 3)向缓冲液储存池中加入添加有体积分数不低于10％的乙醇的所述缓冲液，向样品池中加入所述待测液或含多奈哌齐浓度梯度的参比液； 4)插入电极，以样品池为正极、样品废液池为负极进行进样，所述进样结束后，以缓冲液储存池为正极、缓冲液废液池为负极进行分离；所述进样、分离结束后再重复所述进样、分离至少一次，获得检测结果；所述缓冲液选用前述步骤(3)含有二甲基亚砜的缓冲溶液。 6.根据权利要求5所述的检测多奈哌齐血药浓度的方法，其特征在于，步骤1)中，所述微流控芯片经过近如下预处理：所述微流控芯片为首次使用的微流控芯片，则依次采用硝酸溶液、双蒸馏水、氢氧化钠溶液、双蒸馏水冲洗；所述微流控芯片为重复使用的微流控芯片，则先采用氢氧化钠溶液对进样通道、分离通道进行活化，再用双蒸馏水清洗，最后用所述缓冲液平衡。 7.根据权利要求1至4任一项所述的检测多奈哌齐血药浓度的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述检测选择的分离电压为1kv～2kv、激发频率为50kHz～70kHz、激发电压为50V～70V。 8.根据权利要求7所述的检测多奈哌齐血药浓度的方法，其特征在于，所述检测选择的分离电压为2kv、激发频率为60kHz、激发电压为60V。 9.根据权利要求1至4任一项所述的检测多奈哌齐血药浓度的方法，其特征在于，所述的三氯乙酸溶液的质量浓度为15％～25％。 10.根据权利要求9所述的检测多奈哌齐血药浓度的方法，其特征在于，所述的三氯乙酸溶液的质量浓度为20％。
所属类别：	发明专利