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一种测定工业用纤维素酶酶活力的方法
| 专利名称： | 一种测定工业用纤维素酶酶活力的方法 |
| 摘要： | 本发明涉及酶工程领域，具体涉及一种测定工业用纤维素酶酶活力的方法。本发明评估工业用纤维素酶酶活的方法，包括下列步骤：试剂及材料准备；制作标准曲线；纤维素酶样品处理；设置实验组和对照组，分别加入纤维素酶底物和纤维素酶样品；进行酶解反应；以对照组为空白对照，测试反应上清的吸光度；根据所制得的标准曲线计算出纤维素酶酶活。本发明方法相对于传统的CMC钠盐测定方法，更能有效反馈出纤维素酶对不溶性底物的水解活性，即更能有效反馈出酶在各工业领域的应用潜力；本发明优化后的体系相对于国标法具有更低的检测限。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 广东;44 |
| 申请人： | 广州中国科学院先进技术研究所 |
| 发明人： | 李小明;崔金明;刘陈立;袁海 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2017-12-20T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-06-28T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201711381561.0 |
| 公开号： | CN109946459A |
| 代理机构： | 广州容大专利代理事务所(普通合伙) |
| 代理人： | 刘新年 |
| 分类号： | G01N33/573(2006.01);G;G01;G01N;G01N33 |
| 申请人地址： | 511458 广东省广州市南沙区海滨路1121号A栋 |
| 主权项： | 1.一种测定工业用纤维素酶酶活的方法，其特征在于，包括下列步骤： 2)制作标准曲线； 3)纤维素酶样品处理； 4)设置实验组和对照组，分别加入纤维素酶底物和纤维素酶样品； 5)进行酶解反应； 6)以对照组为空白对照，测试5)中反应上清液的吸光度； 7)根据2)所制得的标准曲线计算出纤维素酶酶活。 2.根据权利要求1所述的测定工业用纤维素酶酶活的方法，其特征在于，所述步骤3)中纤维素酶样品处理包括：纤维素酶样品用pH为6.0-8.0的磷酸缓冲液梯度稀释至合适浓度，使吸光度保持在0.27-0.3。 3.根据权利要求1所述的测定工业用纤维素酶酶活的方法，其特征在于，所述步骤4)中纤维素酶底物为定量滤纸、棉布或其他纤维质材料。 4.根据权利要求3所述的测定工业用纤维素酶酶活的方法，其特征在于，所述纤维素酶底物为不溶性定量滤纸。 5.根据权利要求1所述的测定工业用纤维素酶酶活的方法，其特征在于，所述步骤5)中酶解反应为：在水浴振荡摇床中反应酶解，反应时间在1小时内，然后分别加DNS溶液终止反应。 6.根据权利要求5所述的测定工业用纤维素酶酶活的方法，其特征在于，所述方法反应总体系为4mL。 7.根据权利要求6所述的测定工业用纤维素酶酶活的方法，其特征在于，所述反应体系包括步骤4)加入1mL样品酶液和步骤5)加入3mLDNS终止液。 8.根据权利要求5所述的测定工业用纤维素酶酶活的方法，其特征在于，所述步骤5)的酶解反应体系pH为6.0-8.0、反应温度为50-70℃。 9.将权利要求1-8任意一项所述的方法应用于测定工业用纤维素酶酶活。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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