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一种基于适配体固有构象诱导的检测黄曲霉毒素B1的方法
| 专利名称： | 一种基于适配体固有构象诱导的检测黄曲霉毒素B1的方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种基于适配体固有构象诱导的检测黄曲霉毒素B1的方法，利用TAMRA荧光分子标记黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）的核酸适配体，并加入能特异性识别并嵌入DNA双链结构而发强光的EvaGreen分子，基于荧光共振能量转移（FRET）机制，通过核酸适配体分子对目标分子固有构象响应的变化，结合双链染料EvaGreen的荧光显色，对AFB1进行快速均相定量。本发明公开的方法只利用了核酸适配体的自身结构，避免了核酸探针的复杂设计，另一方面，所有反应在室温下的一个管内进行一次混合步骤即可，消除了分离和温度控制的步骤。该方法具有原理简单、成本低廉、灵敏度高以及选择性好等优点，对AFB1的检测限为0.32 ng/ml，并能对不同食品基质的样品进行检测，是具有竞争力的AFB1快速检测方法。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 四川;51 |
| 申请人： | 四川大学 |
| 发明人： | 邓锐杰;杨淏;赵志峰 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2019-03-15T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-06-28T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201910198063.5 |
| 公开号： | CN109946274A |
| 分类号： | G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21 |
| 申请人地址： | 610065 四川省成都市武侯区一环路南一段24号 |
| 主权项： | 1.一种基于适配体固有构象诱导的检测黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，包括如下步骤： （a）制备黄曲霉毒素B1浓度与荧光强度的标准曲线； （b）按上述制备标准曲线的过程进行待测样品的检测，得到待测样品的荧光强度，通过上述标准曲线计算待测样品中黄曲霉毒素B1的浓度； 其中，制备标准曲线的步骤包括： （1）在缓冲液体系中加入特异性识别双链DNA的荧光染料与AFB1核酸适配体，制备得到AFB1检测液； 所述缓冲液体系包括：超纯水，33 mM Tris-HCl (pH 7.9 at 25 ℃), 10 mM MgCl2,66 mM KCl； 所述荧光染料为具有嵌入DNA双链结构而发强光性质的EvaGreen分子； 所述核酸适配体在其5’端标记有TAMRA荧光分子，其核苷酸序列如序列表中SEQ IDNo.1所示； （2）在AFB1检测液中加入不同浓度的AFB1标准溶液，混匀并反应； （3）测定步骤（2）得到的反应混合溶液的荧光强度，得到荧光强度随AFB1浓度变化的标准曲线。 2.根据权利要求1所述的检测黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，所有反应都在一个试管内、均相溶液中进行。 3.根据权利要求1所述的检测黄曲霉毒素B1方法，其特征在于，步骤（1）的步骤为：将荧光染料与AFB1核酸适配体加入到缓冲溶液中，在室温15~35℃下孵育0~20min得到AFB1检测液。 4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）的步骤为：将准备好的待测AFB1标准溶液加入到步骤（1）所得到的溶液中，在15~35℃下反应25min以上。 5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中的荧光检测条件为激发波长488nm，发射波长范围为518-700nm，扫描步长为1nm。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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