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原文传递测定人血浆中连翘苷及代谢物苷元葡萄糖醛酸结合物、苷元硫酸结合物的检测方法

专利名称：	测定人血浆中连翘苷及代谢物苷元葡萄糖醛酸结合物、苷元硫酸结合物的检测方法
摘要：	本发明涉及测定人血浆中连翘苷及代谢物苷元葡萄糖醛酸结合物、苷元硫酸结合物的检测方法，通过LC‑MS/MS对血浆中连翘苷及代谢物苷元葡萄糖醛酸结合物、苷元硫酸结合物进行分析。本发明方法优选采用蛋白沉淀预处理方法，以替尼泊苷为内标，采用Gemini‑C18柱，梯度洗脱，电喷雾电离源(ESI)串联质谱检测。本发明专一性选择性强、灵敏度高、检测快速、样品用量小，简单、可靠、高通量、条件可控、满足临床大批量样品分析需求。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	苏州海科医药技术有限公司
发明人：	杨勇;陈涛;钟勘;姜金芳;张先锋;李航;陈鑫;敷瑶
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-28T00:00:00+0800
申请号：	CN201910250085.1
公开号：	CN109946408A
代理机构：	苏州唯亚智冠知识产权代理有限公司
代理人：	宋秀丽
分类号：	G01N30/06(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	215000 江苏省苏州市工业园区若水路398号
主权项：	1.测定人血浆中连翘苷及代谢物苷元葡萄糖醛酸结合物、苷元硫酸结合物的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：预处理，采集血浆，加入内标溶液，加入甲醇，涡流及离心后取上清液于氮气流吹干浓缩，残留物以复溶剂溶解，涡流混匀后为待测样品；色谱，将待测样品液相色谱分离，采用Gemini-C18柱，梯度洗脱，在1min时，流动相A：流动相B体积比为85:15，在3.8min时，流动相A：流动相B体积比为43:57，在3.9min时，流动相A：流动相B体积比为5:95，在4.7min时，流动相A：流动相B体积比为5:95，在4.8min内，流动相A：流动相B体积比为85:15，同时，0min时，流速0.5mL/min，在3.90min时，流速0.5mL/min，在3.91min时，流速0.8mL/min，在4.70min时，流速0.8mL/min，在4.71min时，流速0.5mL/min，柱温40℃，自动进样器温4℃，进样量2.0μL，流动相A为万分之一氨水溶液，流动相B为甲醇和乙腈的混合溶液；质谱，采用电喷雾离子源，负离子检测，喷射电压-4500 V，内源气体1(Gas1)60psi，气体2(Gas2)60psi，气帘气体(Curtain Gas)30psi，离子源温度400℃，碰撞诱导解离8psi，驻留时间100ms，连翘苷定量分析离子对m/z 371.1(源内裂解离子)→356.1，碰撞能量(CE)-29eV，去簇电压(DP)-70V，苷元葡萄糖醛酸结合物定量分析离子对m/z 547.2→356.0，碰撞能量(CE)-51eV，去簇电压(DP)-20V，苷元硫酸结合物定量分析离子对m/z 451.2→356.2，碰撞能量(CE)-30eV，去簇电压(DP)-50V，替尼泊苷定量分析离子对m/z 655.3→112.9，碰撞能量(CE)-24eV，去簇电压(DP)-85V。 2.根据权利要求1所述的测定人血浆中连翘苷及代谢物苷元葡萄糖醛酸结合物、苷元硫酸结合物的检测方法，其特征在于：所述预处理步骤，取100μL血浆样品，加入50.0μL内标溶液，加入300μL甲醇，涡流及离心后取300μL上清液于氮气流吹干浓缩，残留物以120μL复溶剂溶解，涡流混匀后为待测样品。 3.根据权利要求2所述的测定人血浆中连翘苷及代谢物苷元葡萄糖醛酸结合物、苷元硫酸结合物的检测方法，其特征在于：所述内标溶液为替尼泊苷溶液。 4.根据权利要求1所述的测定人血浆中连翘苷及代谢物苷元葡萄糖醛酸结合物、苷元硫酸结合物的检测方法，其特征在于：所述质谱采用负离子检测并且检测连翘苷的前体离子或母离子为源内裂解离子，是m/z 371.1。 5.根据权利要求1所述的测定人血浆中连翘苷及代谢物苷元葡萄糖醛酸结合物、苷元硫酸结合物的检测方法，其特征在于：所述色谱步骤，Gemini-C18柱流动相A添加剂为氨水。
所属类别：	发明专利