详情

原文传递固相萃取前处理结合液质联用技术同时检测农业污水中7种结合态雌激素的方法

专利名称：	固相萃取前处理结合液质联用技术同时检测农业污水中7种结合态雌激素的方法
摘要：	本发明提供了一种固相萃取前处理结合液质联用技术同时检测农业污水中7种结合态雌激素的方法。该方法包括：(1)水样预处理，加入17β‑雌二醇D3 3‑β‑D‑葡糖苷酸、17β‑雌二醇硫酸钠‑D4、这两种指示回收率的内标物；(2)使用固相萃取柱富集净化目标结合态雌激素；(3)采用内标法，使用液质联用仪检测农业污水中7种结合态雌激素的含量。该方法采用单因素实验，通过优选内标物，优化检测条件，可一次性同时检测出农业污水中7中结合态雌激素的残留情况，具有高精密度、高灵敏度、高稳定性、高选择性和检出限低等优点。由于内标物质选用恰当，使得最终结果更真实可靠。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海市环境科学研究院
发明人：	胡双庆;沈根祥;张洪昌;郭春霞;钱晓雍;王真;李贞金;张紫琴
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-27T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-02T00:00:00+0800
申请号：	CN201910238539.3
公开号：	CN109959743A
代理机构：	上海精晟知识产权代理有限公司
代理人：	冯子玲
分类号：	G01N30/06(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	200030 上海市徐汇区钦州路508号
主权项：	1.一种固相萃取前处理结合液质联用技术同时检测农业污水中7种结合态雌激素的方法，其特征在于，按以下步骤进行： (1)水样的预处理水样经滤膜过滤除去悬浮物后，分别加入17β-雌二醇D3 3-β-D-葡糖苷酸、17β-雌二醇硫酸钠-D4这两种指示回收率的内标物；调节水样pH； (2)固相萃取富集目标结合态雌激素依次用甲基叔丁基醚、甲醇、超纯水活化固相萃取柱；将步骤(1)中处理过的水样过已活化的固相萃取柱；富集完成后用淋洗液淋洗固相萃取柱并真空干燥；再用一定体积的洗脱溶剂洗脱目标物，收集洗脱液并在氮气流下吹干，所得残渣重新溶解，定容；过滤后转移至进样瓶中，待测； (3)高效液相色谱串联质谱法测定农业污水中7种结合态雌激素的含量采用内标法，在高效液相色谱串联质谱仪上，定量检测经步骤(2)处理得到的进样瓶内的待测样品中从农业污水中富集到的7种结合态雌激素的含量；所述的7种结合态雌激素包括雌酮、17β-雌二醇和雌三醇的硫酸盐或葡糖苷酸盐结合态；7种结合态雌激素分别为雌酮3-硫酸钠、雌酮3-(BETA-D-葡糖苷酸)钠盐、BETA-雌二醇3-硫酸钠盐、17β-雌二醇3-(β-D-葡糖苷酸)钠盐、17β-雌二醇-17-β-D葡糖苷酸、17β-雌二醇17-硫酸钾盐、雌三醇-3-O-β-D葡糖苷酸钠盐。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，分别加入100ng的17β-雌二醇D33-β-D-葡糖苷酸、17β-雌二醇硫酸钠-D4这两种内标物指示回收率。 3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，水样经玻璃纤维滤膜过滤除去颗粒状悬浮物后，先加入指示回收率的内标物，再用稀盐酸调节pH值至3±0.1。 4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，水样过滤所用的玻璃纤维滤膜为孔径0.7μm Whatman GF/F系列玻璃纤维滤膜。 5.根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所用的固相萃取柱是Waters公司Oasis HLB小柱，其吸附剂是由亲脂性二乙烯苯和亲水性N-乙烯基吡咯烷酮两种单体按一定比例聚合成的大孔共聚物，是用于酸性、中性和碱性化合物的通用型吸附剂。 6.根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，活化固相萃取柱所用的甲基叔丁基醚、甲醇和水用量各为固相萃取柱体积的1倍，活化固相萃取柱的流速控制在1-4mL/min；水样过柱流速控制在3-5mL/min；淋洗固相萃取柱所用的三种淋洗液各为固相萃取柱体积的1-2倍；淋洗后抽干，时间为5-10min；洗脱固相萃取柱所用的洗脱溶剂为甲醇，甲醇洗脱溶剂的量为固相萃取柱体积的2倍，洗脱液流速控制在4-5mL/min。 7.根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，淋洗所用的三种溶液依次为体积浓度在10％以下的甲醇-水溶液、pH＝3的超纯水溶液、体积浓度比为2:10:88的氨水-甲醇-水超纯水溶液；洗脱所用的甲醇为HPLC级甲醇；定容残渣所用的甲醇是体积浓度为70％的甲醇-水溶液；洗脱液在水浴加热40℃条件下氮吹至近干；用甲醇定容后，超声2min，再用针式滤器过滤；针式滤器选用孔径小于0.22μm的聚四氟乙烯针式滤头。 8.根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，选用美国AB公司的AB5500Q-trap高效液相色谱串联质谱仪，配岛津30A液相色谱对7种目标结合态雌激素进行检测；液相色谱的色谱柱选用Shim-pack XR-ODSⅡ型号柱，2.0×75mm。 9.根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，液相色谱分离参数为：色谱柱柱温40℃；进样量4μL；进样室温度10℃；流动相流速0.3mL/min；流动相A是体积浓度为0.1％的氨水-水溶液，其中的水为Milli-Q超纯水；流动相B为甲醇；梯度洗脱程序：0-2min，10％B；2.0-2.2min，10％B-50％B；2.2-3.5min，50％B；3.5-3.8min，50％B-97％B；3.8-5.5min，97％B；5.5-5.6min，97％B-10％B；10min，10％B。 10.根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，质谱检测条件为：采用电喷雾离子源负离子模式ESI-，三重四级杆质量分析器，扫描方式：多反应监测模式MRM进行检测；离子源温度为550℃，离子化电压为-4500V，气帘气CUR为35psi，喷雾气GS1为50psi，辅助加热气GS2为50psi，碰撞气CAD为Medium，碰撞气为高纯氮气。
所属类别：	发明专利