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原文传递一种制首乌的质量检测方法

专利名称：	一种制首乌的质量检测方法
摘要：	本发明属于中药质量标准检测的技术领域，公开了制首乌的质量检测方法。采用高效液相色谱法建立制首乌指纹图谱；以红细胞计数、血红蛋白含量、红细胞压积和血小板计数评价其益精血活性。通过灰色关联度分析方法进行谱‑效相关分析，确定制首乌醇溶部位及小分子糖部位中主要有效成分分别为16种和5种，建立制首乌中醇溶部位和小分子糖部位的质量标准，其中醇溶部位主要活性成分峰占比不得低于61.93％，小分子糖部位主要活性成分峰占比不得低于62.58％。本发明所提供的方法基于制首乌谱效关系，建立了一种可通过制首乌指纹图谱直接判定其益精血活性的质控模式，具有简便快捷、客观准确等优点，使制首乌的质量控制体系更加科学、完善。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	无限极(中国)有限公司
发明人：	范罗嫡;梁冰倩;张飘;邓亚雷;戚进;余伯阳;胡明华;马方励
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-17T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-09T00:00:00+0800
申请号：	CN201910411077.0
公开号：	CN109991341A
代理机构：	北京集佳知识产权代理有限公司
代理人：	刘伟;赵青朵
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	529156 广东省江门市新会区会城镇七堡工贸城北区三号
主权项：	1.一种制首乌的质量检测方法，包括如下步骤： (1)制备制首乌的醇溶部位和小分子糖部位； (2)建立制首乌的醇溶部位和小分子糖部位的指纹图谱； (3)制首乌醇溶部位和小分子糖部位的益精血药效学研究， (4)应用灰色关联分析法确定制首乌指纹图谱中共有峰与其益精血药效的关联度，从而确定制首乌中醇溶部位和小分子糖部位的不同共有峰对其益精血药效的影响； (5)根据制首乌中醇溶部位和小分子糖部位的不同共有峰对其益精血药效的影响建立质量标准，利用所建立的质量标准直接评价制首乌质量。 2.根据权利要求1所述的质量检测方法，步骤1)中所述制首乌醇溶部位的制备方法为取制首乌粉末加水提取，浓缩提取液，加入无水乙醇至含醇量为50％，离心；上清液加无水乙醇浓缩至含醇量为80％，离心；浓缩上清液，用D101型大孔树脂富集，水洗脱后，以95％乙醇洗脱即得；所述制首乌小分子糖部位的制备方法为取制首乌粉末加水提取，浓缩提取液，加入无水乙醇，离心；上清液加无水乙醇浓缩，离心；收集沉淀溶解，加无水乙醇浓缩，离心；上清液干燥即得。 3.根据权利要求1所述的质量检测方法，步骤2)中所述醇溶部位指纹图谱的建立包括如下步骤：1)确定HPLC色谱条件；2)建立多批制首乌醇溶部位指纹图谱，经中药色谱指纹图谱相似度评价系统确定共有色谱峰，分析样品间相似度；3)应用HPLC-ESI-MS定性分析制首乌醇溶部位，鉴定其中活性成分。 4.根据权利要求3所述的质量检测方法，所述醇溶部位指纹图谱的HPLC色谱条件为采用Agela Venusil MP C18(250×4.6mm，5μm)色谱柱，流动相由乙腈-0.1％磷酸水组成，流速为1.0mL/min，进样量为10μL，柱温为20℃，检测波长为254nm；检测器为SPD-M20A二极管阵列检测器，梯度洗脱程序如下： 5.根据权利要求1所述的质量检测方法，步骤2)中所述小分子糖部位指纹图谱的建立包括如下步骤：①确定HPLC色谱条件；②建立多批制首乌小分子糖部位指纹图谱，经中药色谱指纹图谱相似度评价系统确定共有色谱峰，分析样品间相似度；③以标准物质分子量的对数值对相应的保留时间制得标准曲线，以求得制首乌小分子糖部位分子量分布情况。 6.根据权利要求5所述的质量检测方法，所述小分子糖部位指纹图谱的HPLC色谱条件为采用TSK gel GMPWxl(300×7.8mm，13μm)色谱柱，0.05M乙酸铵等度洗脱，流速为0.4mL/min，进样量为3μL，柱温为40℃；检测器为Aglient 1260infinity ELSD。 7.根据权利要求1所述的质量检测方法，步骤3)所述制首乌醇溶部位和小分子糖部位的益精血药效学研究为检测多批制首乌醇溶部位和小分子糖部位对红细胞数量、红细胞压积、血小板数量和血红蛋白含量的影响。 8.根据权利要求1所述的质量检测方法，步骤4)所述制首乌中醇溶部位中对其益精血药效的影响关联度较高的主要有效成分为二苯乙烯苷类、黄酮类、蒽醌类；所述制首乌中小分子糖部位中对其益精血药效的影响关联度较高的主要有效成分的分子量在3000Da以下。 9.根据权利要求1所述的质量检测方法，步骤5)所述制首乌中醇溶部位的质量标准为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱，以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水为流动相B，按表1进行梯度洗脱，流速1.0mL/min；检测波长为254nm；理论塔板数按2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰计算不低于2000；醇溶部位16个主要活性成分峰占比不得低于61.93％，按中药色谱指纹图谱相似度评价系统，供试品指纹图谱与对照指纹图谱相似度不得低于0.90。 10.根据权利要求1所述的质量检测方法，步骤5)所述制首乌中小分子糖部位的质量标准为以多孔甲基丙烯酸酯构成填充柱；以0.05M乙酸铵等度洗脱，柱温为40℃，流速为0.4mL/min；ELSD检测器参数为：漂移管温度45℃，载气流速为1.2L/min，小分子糖部位5个主要活性成分峰占比不得低于62.58％，按中药色谱指纹图谱相似度评价系统，供试品指纹图谱与对照指纹图谱相似度不得低于0.90。
所属类别：	发明专利