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原文传递基于谱效关系的制首乌的质量检测方法

专利名称：	基于谱效关系的制首乌的质量检测方法
摘要：	本发明属于中药质量标准检测的技术领域，公开了制首乌的质量检测方法。本发明所述制首乌的质量检测方法基于HPLC‑DPPH联用技术，将制首乌的指纹图谱及清除DPPH活性指纹图谱与活性共有峰进行谱效相关性研究，以制首乌抗氧化效果来判断制首乌品质优劣，建立科学、完善的制首乌抗氧化质量评控标准。本发明所述质量检测方法响应快速、结果直观、定性准确、操作简单、重现性良好。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	无限极(中国)有限公司
发明人：	范罗嫡;梁冰倩;张飘;邓亚雷;戚进;余伯阳;胡明华;马方励
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-17T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-09T00:00:00+0800
申请号：	CN201910411055.4
公开号：	CN109991340A
代理机构：	北京集佳知识产权代理有限公司
代理人：	刘伟;赵青朵
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	529156 广东省江门市新会区会城镇七堡工贸城北区三号
主权项：	1.一种制首乌的质量检测方法，包括如下步骤： 1)制备制首乌的醇溶部位； 2)建立HPLC色谱检测条件； 3)优化DPPH条件； 4)利用HPLC-DPPH联用技术进行在线抗氧化制首乌活性分析，根据制首乌化学指纹图谱、清除DPPH活性指纹图谱选取制首乌抗氧化活性共有峰，建立制首乌化学指纹图谱、清除DPPH活性指纹图谱和抗氧化活性的峰效函数关系； 5)以制首乌化学指纹图谱、清除DPPH活性指纹图谱和制首乌抗氧化活性共有峰建立质量标准，利用所建立的质量标准直接评价制首乌质量。 2.根据权利要求1所述的质量检测方法，步骤1)中所述制首乌醇溶部位的制备方法为取制首乌粉末加水提取，浓缩提取液，加入无水乙醇至含醇量为50％，离心；上清液加无水乙醇浓缩至含醇量为80％，离心；浓缩上清液，用D101型大孔树脂富集，水洗脱后，以95％乙醇洗脱即得制首乌醇溶部位。 3.根据权利要求1所述的质量检测方法，步骤2)中所述HPLC色谱条件为采用AgelaVenusilMP C18(250mm×4.6mm×5μm)色谱柱，检测波长254nm，流速1.0mL/min，柱温30℃，进样量15μL，按如下条件进行梯度洗脱时间(min) 乙腈(％) 0.1磷酸水(％) 0 6 94 6 6 94 10 10 90 15 10 90 25 15 85 45 20 80 70 30 70 75 35 65 85 60 40 90 65 35 100 65 35 105 100 0 110 100 0 。 4.根据权利要求1所述的质量检测方法，步骤3)中优化DPPH条件为分别测试P230Ⅱ外接高压恒流泵泵入的DPPH流速、DPPH浓度、PEEK管长度、PEEK管内径对抗氧化活性测定的影响。 5.根据权利要求4所述的质量检测方法，所述优化的DPPH条件为P230Ⅱ外接高压恒流泵泵入的DPPH流速为0.4mL/min，DPPH浓度为1.0×10-4mol/L，PEEK管长度为6m，PEEK管内径为0.1mm。 6.根据权利要求1所述的质量检测方法，所述制首乌抗氧化活性共有峰为二苯乙烯苷类成分。 7.根据权利要求1所述的质量检测方法，所述制首乌抗氧化活性共有峰为反式2,3,5,4-四羟基二苯乙烯四羟基芪-2-O-β-d葡萄糖苷、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄吡喃糖苷和甲氧基-乙酰基-甲基胡桃醌-葡萄糖苷。 8.根据权利要求1所述的质量检测方法，所述峰效函数关系的建立是以二苯乙烯苷为阳性参比，建立二苯乙烯苷清除DPPH的峰效数学模型，以X为二苯乙烯苷浓度(mg/mL)，Y为活性共有峰峰面积，得到函数关系：Y＝280226.05X-9523.83X2+123.44X3+25866.5，R2＝0.9992。 9.根据权利要求1所述的质量检测方法，所述质量标准的建立是结合多批制首乌的化学指纹图谱和活性指纹图谱，以其中的活性共有峰对色谱共有峰总峰面积平均占比的80％为质量标准；运用中药指纹图谱相似度评价软件，对多批制首乌进行相似度分析，选取相似度最小值为质量标准。 10.根据权利要求9所述的质量检测方法，所述质量标准是以2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄吡喃糖苷为特征峰，以活性共有峰峰面积对色谱共有峰总峰面积平均占比的80％作为质控下限，醇溶部位活性成分峰占比不得低于53.16％；按中药色谱指纹图谱相似度评价系统，供试品指纹图谱与对照指纹图谱相似度不得低于0.99；以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.1％磷酸水为流动相，按权利要求3所述条件进行梯度洗脱，流速1.0mL/min，检测波长254nm，2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄吡喃糖苷与相邻峰的分离度应大于2.5。
所属类别：	发明专利