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原文传递一种测定血浆中头孢克洛的方法

专利名称：	一种测定血浆中头孢克洛的方法
摘要：	本发明公开了一种测定血浆中头孢克洛的方法，包括以下步骤：储备液的配制、工作液的配制、标准曲线和质控样本的配制、内标工作液的配制、样品预处理方法和LC‑MS/MS分析；该方法可用于头孢克洛制剂生物等效性的研究，可用于EDTA‑K2抗凝人血浆中头孢克洛浓度定量分析，与HPLC法相比，本法更为灵敏，头孢克洛的定量下限从0.1mg/mL降低到了0.050mg/mL，本法采用蛋白沉淀法处理样本，操作方便，无基质效应，持续进样240针不影响测定分析的准确度，同时分析时间大为缩短。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	武汉伯瑞恒医药科技有限公司
发明人：	刘文伟
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-09T00:00:00+0800
申请号：	CN201910352698.6
公开号：	CN109991335A
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	430000 湖北省武汉市东湖开发区高新大道666号武汉国家生物产业基地项目B、C、D区研发楼B1栋
主权项：	1.一种测定血浆中头孢克洛的方法，其特征在于，包括以下步骤： S1：储备液的配制：用乙酸：水（5：95，v：v）作为稀释液溶解头孢克洛对照品，得浓度为400μg/mL的头孢克洛标准曲线储备液（STD Stock-TBKL）和头孢克洛质控储备液（QCStock-TBKL）； S2：工作液的配制：标准曲线工作液以STD Stock-TBKL为起始溶液，以乙酸：水（5：95，v：v）溶液为稀释溶剂逐级稀释得到头孢克洛的各级标准曲线工作液；质控工作液以QCStock-TBKL为起始溶液，以乙酸：水（5：95，v：v）溶液为稀释溶剂逐级稀释得到头孢克洛的各级质控工作液； S3：标准曲线和质控样本的配制：吸取95%体积的EDTA-K2抗凝人空白血浆，加入5%体积上述各浓度的工作液，再加入10%体积的乙酸：水（10：90，v：v）酸化含药血浆，得到酸化的曲线样本和质控样本； S4：内标工作液的配制：用乙酸：水（5：95，v：v）作为稀释液头孢克洛-d5对照品，的到浓度为2mg/mL头孢克洛-d5内标工作液； S5：样品预处理方法：取酸化血样（每 200mL含药血浆加入乙酸：水（7.5：92.5，v：v）20mL）50mL于96孔板中，加入30mL内标工作液，加入含 0.1%甲酸的甲醇 450mL，涡旋10min，高速离心15 分钟，取上清50mL于另一96 深孔板中，再加入450mL的 0.1%甲酸水稀释，摇匀，高速离心3 分钟后进 LC-MS/MS 分析，进样体3mL； S6：LC-MS/MS分析：LC-MS/MS系统由TRIPLE QUADU 5500 型三重四极杆串联质谱仪（ABSciex）、高压泵、在线脱气机、自动进样器、柱温箱及控制器组成，柱温箱和进样器的温度分别设定为40℃和4℃，使用型号为Waters ACQUITY UPLC® HSS T3 1.8μm, 2.1*100mm的色谱柱作为分离柱；流动相：2 mM 乙酸铵和 0.1%甲酸水溶液-2 mM 乙酸铵和0.1%甲酸的95%乙腈（85:15），等度条件，流速为0.40mL/min分离分析物，分析时间为2.5分钟；离子源的极性为正模式，离子监测方式为多反应监测（MRM），头孢克洛、内标(氘代头孢克洛)的离子对分别为368.0/174.0 、373.1/179.0；经过电参数优化后，去簇电压（DP））为60V，碰撞电压（CE）分别为19V，数据采集系统为Analyst1.6.3。 2.根据权利要求1所述的一种测定血浆中头孢克洛的方法，其特征在于：所述S5中前后两次高速离心的速度均为4000rpm。 3.根据权利要求1所述的一种测定血浆中头孢克洛的方法，其特征在于：所述S6中高压泵的型号为LC-30AD、在线脱气机的型号为DGU-20A-5R、自动进样器的型号为SIL-30AC、柱温箱的型号为CTO-20A、控制器的型号为CBM-20Alite。
所属类别：	发明专利