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原文传递一种测定血浆中洛索洛芬及其反式羟基体浓度的方法

专利名称：	一种测定血浆中洛索洛芬及其反式羟基体浓度的方法
摘要：	本发明公开了一种测定血浆中洛索洛芬及其反式羟基体浓度的方法，包括以下步骤：储备液的配制、工作液的配制、标准曲线和质控样本的配制、样品预处理方法以及LC‑MS/MS分析；本法建立了一种简单、快速、耐用、灵敏度高和选择性好的用于同时测定EDTA‑K2抗凝人血浆中洛索洛芬及其活性代谢物反式‑OH血药浓度的LC‑MS/MS方法，该方法可用于EDTA‑K2抗凝人血浆中洛索洛芬和反式‑OH体洛索洛芬的同时定量分析，与荧光法和紫外检测法相比，本法更为灵敏，洛索洛芬的定量下限从0.31mg/mL和0.20mg/mL降低到了0.050mg/mL，反式‑OH体洛索洛芬的定量下限从0.31mg/mL和0.20mg/mL降低到了0.010mg/mL，同时分析时间大为缩短，从25min和30min缩短到了3.5min。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	武汉伯瑞恒医药科技有限公司
发明人：	刘文伟
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-09T00:00:00+0800
申请号：	CN201910352697.1
公开号：	CN109991334A
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	430000 湖北省武汉市东湖开发区高新大道666号武汉国家生物产业基地项目B、C、D区研发楼B1栋
主权项：	1.一种测定血浆中洛索洛芬及其反式羟基体浓度的方法，其特征在于，包括以下步骤： S1：储备液的配制：用甲醇：水（1：1，v：v）作为稀释液溶解洛索洛芬和反式-OH体洛索洛芬对照品，得浓度为400μg/mL的洛索洛芬标准曲线储备液（STD Stock-LSLF）和洛索洛芬质控储备液（QC Stock-LSLF），浓度为200μg/mL的反式-OH体洛索洛芬标准曲线储备液（STDStock-Trans-OH）和反式-OH体洛索洛芬质控储备液（QC Stock-Trans-OH）； S2：工作液的配制：标准曲线工作液以STD Stock-LSLF和STD Stock-Trans-OH为起始溶液，以甲醇：水（1：1，v：v）溶液为稀释溶剂逐级稀释得到同时含有洛索洛芬和反式-OH体洛索洛芬的各级标准曲线工作液；质控工作液以QC Stock-LSLF和QC Stock-Trans-OH为起始溶液，以甲醇：水（1：1，v：v）溶液为稀释溶剂逐级稀释得到同时含有洛索洛芬和反式-OH体洛索洛芬的各级质控工作液； S3：标准曲线和质控样本的配制：吸取95%体积的EDTA-K2抗凝人空白血浆，加入5%体积上述各浓度的工作液，得到曲线样本和质控样本； S4：样品预处理方法：取50μL血浆样品于96孔板中，加入内标溶液30μL(氘代洛索洛芬2μg/mL)，加入沉淀剂甲醇 450μL，震荡5min，高速离心(4000rpm)15分钟，取上清200μL 于另一96 深孔板中，高速离心(4000 rpm)3分钟后进LC-MS/MS 分析，进样体积1μL； S5：LC-MS/MS分析：LC-MS/MS系统由Q-Trap 5500 型三重四极杆串联质谱仪（ABSciex）、高压泵（LC-30AD）、在线脱气机（DGU-20A-5R）、自动进样器（SIL-30AC）、柱温箱（CTO-20A）及控制器CBM-20Alite组成；柱温箱和进样器的温度分别设定为40℃和4℃，使用型号为Welch，Ultimate XP-C18, 5.0 μm, 2.1*100 mm的色谱柱作为分离柱，乙腈：水：乙酸（40：60：1，v：v：v）作为流动相，等度条件，流速为0.60mL/min分离分析物，分析时间为3.5分钟；离子源的极性为正模式，离子监测方式为多反应监测（MRM），经过电参数优化后，去簇电压（DP）分别为-80、50、55V，碰撞电压（CE）分别为-18、-11和-19V，数据采集系统为Analyst1.6.3。 2.根据权利要求1所述的一种测定血浆中洛索洛芬及其反式羟基体浓度的方法，其特征在于：所述S5中高压泵的型号为LC-30AD、在线脱气机的型号为DGU-20A-5R、自动进样器的型号为SIL-30AC、柱温箱的型号为CTO-20A、控制器的型号为CBM-20Alite。 3.根据权利要求1所述的一种测定血浆中洛索洛芬及其反式羟基体浓度的方法，其特征在于：所述S5中洛索洛芬、反式-OH体洛索洛芬以及内标(氘代洛索洛芬)的离子对分别为245.1-83.1、247.1-203.1和249.1-87.1。
所属类别：	发明专利