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原文传递一种用于检测赭曲霉素A的试剂盒及方法

专利名称：	一种用于检测赭曲霉素A的试剂盒及方法
摘要：	本发明提供了一种用于检测赭曲霉素A的试剂盒及方法，属于生物检测技术领域。本发明所述试剂盒包括AP链溶液、SP链溶液、b1链溶液、b2链溶液、c链溶液和链霉亲合素功能化磁性颗粒。本发明利用级联DNA链置换反应介导的核酸信号放大策略，实现了赭曲霉素A的灵敏检测。与现有技术相比，本发明提供的试剂盒用于赭曲霉素A的检测，工作时间仅20min，最低检测线为0.056ng/mL。本发明提供的试剂盒用于赭曲霉素A的检测无需核酸工具酶的参与，且信号放大效率高、速度快，具有检测速度快、灵敏度高等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海大学
发明人：	曹亚;王莹;韩兵;赵婧
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-18T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-09T00:00:00+0800
申请号：	CN201910313916.5
公开号：	CN109991203A
代理机构：	北京高沃律师事务所
代理人：	瞿晓晶
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	201900 上海市宝山区上大路99号
主权项：	1.一种用于检测赭曲霉素A的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括AP链溶液、SP链溶液、b1链溶液、b2链溶液、c链溶液和链霉亲合素功能化磁性颗粒；所述AP链溶液中的AP链为赭曲霉素A的核酸适体；所述AP链的3’端修饰有生物素基团；所述SP链溶液中的SP链包括区域1和区域2，所述区域1与所述AP链存在互补碱基序列；所述区域2为级联DNA链置换反应的启动模块；所述b1链溶液中的b1链3'端修饰有猝灭基团；所述b2链溶液中的b2链5'端修饰有荧光基团；所述c链溶液中的c链为游离单链；所述b1链与所述b2链存在互补碱基序列；所述b1链与所述c链存在互补碱基序列；所述b1链与所述SP链区域2存在互补碱基序列；赭曲霉素A与AP链的结合力＞AP链与SP链的结合力； b1链与SP链的结合力＞b1链与b2链的结合力； c链与b1链的结合力＞b1链与SP链的结合力。 2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述AP链的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述SP链的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。 3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述b1链的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述b2链的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。 4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述c链的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。 5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，SP链和AP链碱基互补序列长度为12～16bp；b1链和b2链碱基互补序列长度为14～18bp。 6.根据权利要求1～4任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述AP链溶液或所述SP链溶液的浓度独立为20～50μmol/L；所述b1链溶液、b2链溶液或所述c链溶液的浓度独立为1～5μmol/L。 7.权利要求1～6任意一项所述试剂盒在定量检测赭曲霉素A中的应用。 8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，包括如下步骤： (1)将AP链溶液和SP链溶液按1：1的溶质摩尔比混合，90～95℃水浴反应5～10min，得到AP/SP双链溶液； (2)将b1链溶液和b2链溶液按1：1的溶质摩尔比混合，90～95℃水浴反应5～10min，得到b1/b2双链溶液； (3)将所述AP/SP双链溶液与链霉亲合素功能化磁性颗粒的重悬液混合，25～30℃反应15～20min，得到AP/SP双链修饰的磁性颗粒重悬液； (4)将待测样品与所述AP/SP双链修饰的磁性颗粒重悬液混合，25～30℃反应30～60min，磁分离弃磁性颗粒，得到上清液； (5)将所述b1/b2双链溶液、c链溶液和所述上清液混合，0～5℃反应15～25min，得到b1/c双链溶液； (6)测定所述b1/c双链溶液的荧光发生强度。 9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，步骤(3)所述链霉亲合素功能化磁性颗粒的重悬液的制备方法包括如下步骤： ①将链霉亲合素功能化磁性颗粒与磷酸盐缓冲液混合，磁分离弃溶液，得到清洗后的链霉亲合素功能化磁性颗粒； ②将所述清洗后的链霉亲合素功能化磁性颗粒重悬于磷酸盐缓冲液中，得到链霉亲合素功能化磁性颗粒的重悬液。 10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，步骤(6)所述测定的实验条件为：激发波长490nm，发射波长扫描范围510～600nm。
所属类别：	发明专利