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原文传递一种HIV新发感染检测试剂盒和制备方法

专利名称：	一种HIV新发感染检测试剂盒和制备方法
摘要：	本发明公开了一种HIV新发感染检测试剂盒和制备方法，涉及生物技术领域，该试剂盒采用一步酶反应法，极大缩短了检测时间，灵敏度高，特异性强，稳定性好，能够同时检测我国HIV流行亚型B、E和D共3种抗原，提高了HIV新发感染检测的准确率。采用二次包被的方法包被酶联板，极大降低了检测原料的添加量，采用间接标记，提高了抗原的活性、反应一致性和准确率。有利于进行微量样本的检测，减少了空间位阻，提高了反应效率、灵敏度和特异性。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京新创生物工程有限公司
发明人：	刘兴旺;景滢滢
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-24T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-19T00:00:00+0800
申请号：	CN201910336950.4
公开号：	CN110031621A
代理机构：	北京超成律师事务所
代理人：	高荣英
分类号：	G01N33/535(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	102200 北京市昌平区北七家高科技工业园12号
主权项：	1.一种HIV新发感染检测试剂盒，其特征在于，包括检测抗原，所述检测抗原为重组抗原，所述重组抗原包括HIVgp41中的HIV-1B、E和D蛋白片段，所述HIV B、E和D蛋白片段均带有标签。 2.根据权利要求1所述的HIV新发感染检测试剂盒，其特征在于，所述标签可以是Trx标签，Flag标签，MBP(麦芽糖结合蛋白)，GST(谷胱甘肽巯基转移酶)，Avi标签，SUMO标签，c-Myc标签和HA标签中的任意一种；优选的，所述标签为Trx标签。 3.根据权利要求1所述的HIV新发感染检测试剂盒，其特征在于，所述标签上通过亲和识别连接有与所述标签相匹配的抗体标签，优选的，所述抗体标签为鼠抗标签，所述抗体标签上标记有酶，所述酶可以是辣根过氧化物酶(HRP)，碱性磷酸酶(AP)，葡萄糖氧化酶，β-半乳糖苷酶、溶菌酶和苹果酸脱氢酶中的任意一种；优选的，所述酶为辣根过氧化物酶(HRP)。 4.根据权利要求1所述的HIV新发感染检测试剂盒，其特征在于，所述HIV B、E和D蛋白片段分别通过设置连接肽与所述标签连接，所述连接肽的核苷酸序列如序列1所示，所述连接肽的氨基酸序列如序列5所示。 5.根据权利要求1所述的HIV新发感染检测试剂盒，其特征在于，所述HIVgp41中的HIV-1 B的核苷酸序列如序列2所示，所述HIVgp41中的HIV-1 E的核苷酸序列如序列3所示，所述HIVgp41中的HIV-1 D的核苷酸序列如序列4所示，HIV-1 B的氨基酸序列如序列6所示，所述HIVgp41中的HIV-1 E的氨基酸序列如序列7所示，所述HIVgp41中的HIV-1 D的氨基酸序列如序列8所示。 6.根据权利要求1所述的HIV新发感染检测试剂盒，其特征在于，所述HIV新发感染检测试剂盒还包括酶联板，所述酶联板上包被有X抗羊IgG和羊抗人IgG两种原料，X可以是鼠，兔和猪中的任意一种，所述X抗羊IgG的稀释比例为1:1000～5000，所述羊抗人IgG的稀释比例为1:1000～10000；优选的，X为鼠，所述X抗羊IgG的稀释比例为1:2500；所述羊抗人IgG的稀释比例为1:6000。 7.一种如权利要求1所述的HIV新发感染试剂盒的制备方法，其特征在于，包括重组抗原的制备，将HIVgp41中的HIV-1 B、E和D分别进行全基因合成得到HIV-1 B、E和D三种目的基因，将三种目的基因转入带有所述标签的载体中，分别表达获得带有所述标签的HIV-1B、E和D蛋白片段，再将HIV-1 B、E和D蛋白片段分别按比例混合制得带有标签的重组抗原；优选的，将HIV-1 B、E和D蛋白片段分别按照1：1：1的比例混合制得带有标签的重组抗原。 8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，还包括在带有标签的重组抗原上通过亲和识别连接抗体标签，包括如下步骤：先将所述抗体标签上标记酶形成酶标物，再将所述酶标物与带有所述标签的重组抗原按照1:20-30的比例混合，亲和连接，组成酶结合物；优选的，所述酶标物与带有所述标签的重组抗原按照1:23的比例混合。 9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，还包括酶联板的制备，所述酶联板的制备采用的是二次包被方法，具体包括如下步骤：先在酶联板上包被X抗羊IgG，再包被羊抗人IgG。 10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述包被X抗羊IgG的包被时间为15-18h，所述X抗羊IgG的稀释比例为1:1000～5000，所述包被羊抗人IgG的包被时间为15-18h，所述羊抗人IgG的稀释比例为1:1000～10000；优选的，所述包被X抗羊IgG的包被时间为16h，所述X抗羊IgG的稀释比例为1:2500，所述包被羊抗人IgG的包被时间为16h，所述羊抗人IgG的稀释比例为1:6000。
所属类别：	发明专利