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原文传递一种基于HIV-1载体的慢病毒滴度检测卡及其制备和应用

专利名称：	一种基于HIV-1载体的慢病毒滴度检测卡及其制备和应用
摘要：	本发明公开了一种基于HIV‑1载体的慢病毒滴度检测卡及其制备和应用，涉及生物技术检测领域。该检测卡所用的金标液包括胶体金、鼠抗人p24单克隆抗体、牛血清白蛋白、硫酸软骨素和叠氮钠；所用的检测溶液含有鼠抗兔p24单克隆抗体；所述质控溶液含有羊抗BSA多克隆抗体。可以用于相关慢病毒载体和假病毒包装效率的快速评估，有效提高了检测灵敏度，该检测卡的检测下限为1ng/mL，提高了检测结果的精密度和准确度，缩短了检测时间。与传统的HIV‑1慢病毒滴度检测方法相比，使用更加简便快速，降低了检测成本。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	苏州博特龙免疫技术有限公司
发明人：	刘立成
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-28T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201910453274.9
公开号：	CN110045119A
代理机构：	广州市红荔专利代理有限公司
代理人：	关家强
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	215143 江苏省苏州市相城经济开发区观塘路1号西交大漕湖科技园C幢811室
主权项：	1.一种基于HIV-1载体的慢病毒滴度检测卡，包括卡体外壳、试纸条和背板，所述卡体外壳上设有加样孔和检测窗，所述试纸条粘贴在背板上，所述卡体外壳与背板扣合，所述试纸条采用搭接的方式，依次设有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，其特征在于，所述金标垫上结合有金标液；所述硝酸纤维素膜上设有检测线T和质控线C；所述检测线T上喷有检测溶液，检测线C上喷有质控溶液；所述金标液包括胶体金、鼠抗人p24单克隆抗体、牛血清白蛋白、硫酸软骨素和叠氮钠；所述检测溶液含有鼠抗兔p24单克隆抗体；所述质控溶液含有羊抗BSA多克隆抗体。 2.根据权利要求1所述的慢病毒滴度检测卡，其特征在于，所述的金标液包括胶体金10％-20％(v/v)、鼠抗人p24单克隆抗体2-10μg/mL、牛血清白蛋白0.5％-1％(w/v)、硫酸软骨素0.5-2μg/mL和叠氮钠0.05％(w/v)。 3.根据权利要求2所述的慢病毒滴度检测卡，其特征在于，所述的鼠抗人p24单克隆抗体：胶体金＝10-100μg：1mL。 4.根据权利要求3所述的慢病毒滴度检测卡，其特征在于，所述的鼠抗人p24单克隆抗体：胶体金＝50-100μg：1mL。 5.根据权利要求1所述的慢病毒滴度检测卡，其特征在于，所述检测溶液含有浓度为0.5-1mg/mL的鼠抗兔p24单克隆抗体；所述质控溶液含有浓度为0.5-1mg/mL的羊抗BSA多克隆抗体。 6.根据权利要求1所述的慢病毒滴度检测卡，其特征在于，所述检测线T和质控线C上的检测溶液和质控溶液的喷膜量均为0.2-0.8μl/cm。 7.根据权利要求1所述的慢病毒滴度检测卡，其特征在于，所述胶体金的大小为15-28nm。 8.根据权利要求1所述的慢病毒滴度检测卡，其特征在于，所述的检测还包括比色卡；所述比色卡上显示有对应的检测线显示颜色的深浅度，其对应的检测样品中含有p24蛋白浓度的范围为1-500ng/mL。 9.一种权利要求1-8任意一项所述的慢病毒滴度检测卡的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤： S1、金标液的制备：将鼠抗人p24单克隆抗体和胶体金按照10-100μg：1mL的比例混合，加入0.2M的KCl调节pH＝7.5-8.0，加入PBS缓冲液，搅拌，离心弃上清；在沉淀中加入终浓度为0.5％-1％(w/v)的牛血清白蛋白水溶液，搅拌，离心弃上清，用PBS缓冲液清洗沉淀，加入终浓度为0.5-2μg/mL硫酸软骨素、0.05％(w/v)的叠氮钠和PBS缓冲液，制得金标液； S2、检测溶液和质控溶液的配制：将鼠抗兔p24单克隆抗体用0.1M、pH＝8.0的碳酸氢钠缓冲液稀释至0.5-1mg/mL，加入0.2mg/mL的赖氨酸和1mol/L的NH4Cl溶液，搅拌混匀，得到混合液，再用0.1M、pH＝8.0的碳酸氢钠缓冲液透析混合液，得到检测溶液；将羊抗BSA多克隆抗体用0.1M、pH＝8.0的碳酸氢钠缓冲液稀释至0.5-1mg/mL，加入0.2mg/mL的赖氨酸和1mol/L的NH4Cl溶液，搅拌混匀，得到混合液，再用0.1M、pH＝8.0的碳酸氢钠缓冲液透析混合液，得到质控溶液； S3、样品垫的制备：用含有0.5％(w/v)的NaCl、0.5％(w/v)的蔗糖、0.1％(w/v)的牛血清白蛋白和Tris-HCl缓冲液，pH＝7.5的溶液浸泡玻璃纤维膜，干燥，得到样本垫； S4、金标垫的制备：将步骤S1制得的金标液固相于玻璃纤维膜上，得到金标垫； S5、硝酸纤维素膜的包被：将步骤S2制得的检测溶液和质控溶液喷于硝酸纤维素膜上，喷膜量均为0.2-0.8μl/cm，形成检测线T和质控线C，烘干，得到硝酸纤维素膜； S6、试纸条的制备：在步骤S3得到的样品垫下方粘贴有步骤S4得到的金标垫，样品垫覆盖金标垫边沿1.0毫米；步骤S4得到的金标垫下方粘贴有步骤S5得到的硝酸纤维素膜，金标垫覆盖硝酸纤维素膜边沿1.0毫米；硝酸纤维素膜另一侧上方粘贴有吸水纸，吸水纸覆盖硝酸纤维素膜边沿1.0毫米；得到试纸条； S7、慢病毒滴度检测卡的组装：将步骤S6制备的试纸条放入卡体外壳的内部凹槽中，样品垫和硝酸纤维素膜分别位于加样孔和检测窗的正下方，扣合卡体外壳，得到慢病毒滴度检测卡。 10.根据权利要求1-8任意一项所述的慢病毒滴度检测卡在慢病毒载体和假病毒包装效率评估中的应用。
所属类别：	发明专利