详情

原文传递一种杜仲提取物中7个入血成分的浓度测定方法

专利名称：	一种杜仲提取物中7个入血成分的浓度测定方法
摘要：	本发明公开一种杜仲提取物中7个入血成分的浓度测定方法，首先用京尼平苷酸、原儿茶酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷和松脂醇单葡萄糖苷配制标准对照液；用葛根素配置内标溶液；然后采用HPLC‑ESI‑MS/MS分析方法，建立同时测定大鼠血浆中杜仲提取物中7个成分的浓度的分析方法；结果表明，本发明的测定方法具有线性范围广、灵敏度高、定量限低的优点，能够准确可靠的同时测定给自发性高血压大鼠灌胃给予杜仲提取物后的15个不同时间点所得大鼠血浆中杜仲提取物中的7个成分的浓度，可以为研究杜仲提取物中7个成分的药代动力学特征提供技术支撑。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	贵州;52
申请人：	贵州医科大学
发明人：	巩仔鹏;郑林;王爱民;黄勇;王永林;刘丽娜;张楠;吴林霖;李月婷;王广成;李梅;胡贺佳;肖红琴;陈思颖
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-10T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201910386959.6
公开号：	CN110057938A
代理机构：	贵阳中新专利商标事务所
代理人：	刘楠;朱法恒
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	550001 贵州省贵阳市北京路9号贵州医科大学
主权项：	1.一种杜仲提取物中7个入血成分的浓度测定方法，其特征在于包括以下步骤：步骤(1)：用京尼平苷酸、原儿茶酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷和松脂醇单葡萄糖苷配制7个成分的标准对照液，用葛根素配制内标溶液，然后建立血浆样品的处理方法，并采用高液相色谱-电喷雾-串联质谱HPLC-ESI-MS/MS联用仪对7个成分的色谱条件和质谱条件进行优化，确定7个成分优化的色谱条件如下：色谱柱：Waters BEH C18，2.1mm×100mm，1.7μm，保护柱：Waters Van Guard BEH C18，2.1mm×5mm，1.7μm，流速：0.30mL·min-1，柱温：40℃，流动相：0.1％甲酸水A，0.1％甲酸乙腈B，梯度洗脱，进样体积为1μL，并且确定7个成分优化的质谱条件；步骤(2)：建立同时测定杜仲提取物中7个入血成分的浓度的HPLC-ESI-MS/MS方法，并对该方法进行验证，包括专属性考察、标准曲线的制备、准确度和精密度、提取回收率、基质效应以及稳定性考察；最后，将上述方法用于测定模型大鼠以一定剂量灌胃杜仲提取物后15个不同时间点所得血浆中的7个入血成分的浓度。 2.根据权利要求1所述的杜仲提取物中7个入血成分的浓度测定方法，其特征在于：步骤(1)所述优化的梯度洗脱，具体洗脱梯度如下：0～0.5min，90％～90％(A)；0.5～7.5min，90％～75％(A)；7～8min，75％～65％(A)；8～9min，65％～10％(A)；9～9.5min，10％～10％(A)；9.5～10.5min，10％～90％(A)；10.5～13min，90％～90％(A)。 3.根据权利要求1所述的杜仲提取物中7个入血成分的浓度测定方法，其特征在于：步骤(1)所述优化的质谱条件，具体如下：采用电喷雾电离源(ESI)，离子化电压(IS)：4500V，离子源温度(TEM)：550℃，气帘气(CUR，N2)：40psi，喷撞气(CAD，N2)：Medium，喷雾气(GS1，N2)：55psi，辅助加热气(GS2，N2)：55psi，扫描方式为多反应离子监测(MRM)；离子对如下：京尼平苷酸m/z373.20→123.00、原儿茶酸m/z 152.90→109.10、新绿原酸m/z353.17→191.04、绿原酸m/z 353.19→191.03、隐绿原酸m/z 353.21→173.10、松脂醇二葡萄糖苷m/z 681.00→357.20、松脂醇单葡萄糖苷m/z 519.2→357.20、葛根素(内标)417.10→267.10；DP电压分别为：-40v、-60v、-51v、-70v、-80v、-70v、-76v、110v；EP电压分别为：-6v、-6v、-7v、-7v、-5v、-4v、-8v、7v；CE电压分别为：-26v、-21v、-19v、-24v、-21v、-35v、-25v、35v；CXP电压分别为：-6v、-9v、-8v、-7v、-10v、-23v、-31v、6v。 4.根据权利要求1所述的杜仲提取物中7个入血成分的浓度测定方法，其特征在于：步骤(2)所述的模型大鼠是指自发性高血压大鼠。 5.根据权利要求1所述的杜仲提取物中7个入血成分的浓度测定方法，其特征在于：步骤(2)所述的一定剂量是指5～10g/kg。
所属类别：	发明专利