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原文传递癌胚抗原CEA定量检测试剂盒及其应用

专利名称：	癌胚抗原CEA定量检测试剂盒及其应用
摘要：	本发明公开了一种癌胚抗原CEA定量检测试剂盒及其应用，涉及生物技术领域。所述癌胚抗原CEA定量检测试剂盒包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂和发光底物，其中，所述抗试剂的制备步骤为：将癌胚抗原CEA抗体分别与异硫氰酸荧光素和碱性磷酸酯酶偶联，获得异硫氰酸荧光素标记的CEA包被抗体和碱性磷酸酶标记的CEA包被抗体，将异硫氰酸荧光素标记的CEA包被抗体和碱性磷酸酶标记的CEA标记抗体加入抗试剂缓冲液中，充分搅拌；所述磁微粒试剂的制备步骤为：清洗羧基磁珠，将异硫氰酸荧光素单克隆抗体与羧基磁珠偶联，清洗并保存。本发明既能提高检测灵敏度及可靠性，又能降低成本。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	山东博科生物产业有限公司
发明人：	宋现让;谢清华;甘宜梧;韩重;王秀;胡晓飞;罗维晓
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201910455098.2
公开号：	CN110058022A
分类号：	G01N33/574(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	250299 山东省济南市章丘区明水经济开发区(经十东路与明埠路交界山东博科产业园)
主权项：	1.一种癌胚抗原CEA定量检测试剂盒，其特征在于，包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂和发光底物，其中，所述抗试剂的制备步骤为：将癌胚抗原CEA抗体分别与异硫氰酸荧光素和碱性磷酸酯酶偶联，获得异硫氰酸荧光素标记的CEA包被抗体和碱性磷酸酶标记的CEA包被抗体，将异硫氰酸荧光素标记的CEA包被抗体和碱性磷酸酶标记的CEA标记抗体加入抗试剂缓冲液中，充分搅拌；所述磁微粒试剂的制备步骤为：清洗羧基磁珠，将异硫氰酸荧光素单克隆抗体与羧基磁珠偶联，清洗并保存。 2.根据权利要求1所述的癌胚抗原CEA定量检测试剂盒，其特征在于，所述异硫氰酸荧光素标记的CEA包被抗体的制备步骤进一步为：将异硫氰酸荧光素加入抗试剂缓冲液中，配置异硫氰酸荧光素溶液，使异硫氰酸荧光素溶液的最终浓度为1.0～5.0mg/mL；将质量比为1.1:1的向异硫氰酸荧光素溶液和癌胚抗原CEA充分混匀10～20小时，充分反应后加入碳酸氢盐缓冲液进行平衡，然后凝胶层析分离纯化。 3.根据权利要求1所述的癌胚抗原CEA定量检测试剂盒，其特征在于，所述碱性磷酸酶标记的CEA标记抗体的制备步骤进一步为：将碱性磷酸酶加入抗试剂缓冲液中，配置碱性磷酸酶溶液，使碱性磷酸酶溶液的最终浓度为1.0～3.0mg/mL；将摩尔比为1.5:1的碱性磷酸酶溶液和癌胚抗原CEA充分混匀14～24小时，充分反应后加入含有表面活性剂的Tris盐缓冲液进行平衡，然后凝胶层析分离纯化；所述Tris盐缓冲液的组分及含量如下：Tris缓冲液12.12mg，氯化钠5.82mg。 4.根据权利要求1所述的癌胚抗原CEA定量检测试剂盒，其特征在于，所述磁微粒试剂的制备步骤进一步为：步骤1：对羧基磁珠清洗浓缩液进行磁场分离，待羧基磁珠沉降后弃上清；步骤2：向所述步骤1得到的溶液中加入2～5倍于羧基磁珠体积的磁微粒缓冲液，混匀20～30min；步骤3：对所述步骤2得到的溶液进行磁场分离，待羧基磁珠沉降后弃上清，最后得到10～50mg/mL的羧基磁珠溶液；步骤4：将质量比为100:1的羧基磁珠溶液和异硫氰酸荧光素单克隆抗体充分混匀反应18h；步骤5：对所述步骤4得到的溶液进行磁场分离，待羧基磁珠沉降后使用磁微粒缓冲液清洗，最后得到10mg/mL的磁微粒试剂。 5.根据权利要求1至4中任一所述的癌胚抗原CEA定量检测试剂盒，其特征在于，所述发光底物的组分为APS-5和发光底物缓冲液，体积比为1:4～10，其中，所述发光底物缓冲液的组分及含量为：Tris缓冲液12.12g/L，氯化钠5.82g/L，光泽精0.03g/L。 6.根据权利要求1至4中任一所述的癌胚抗原CEA定量检测试剂盒，其特征在于，所述抗试剂缓冲液的组分及含量为： 7.根据权利要求1至4中任一所述的癌胚抗原CEA定量检测试剂盒，其特征在于，所述校准品和质控品的制备步骤为：使用校准品缓冲液溶解癌胚抗原CEA，得到0ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、50ng/mL和150ng/mL的校准品以及10ng/mL、50ng/mL的质控品，其中，所述校准品缓冲液的组分及含量为：血清500g/L，四环素0.01～0.05g/L，硫酸新霉素0.1～0.5g/L。 8.根据权利要求1-4中任一所述的癌胚抗原CEA定量检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括清洗液，所述清洗液的组分及含量为： 9.一种如权利要求1至8中任一所述的试剂盒作为体外诊断试剂的应用。
所属类别：	发明专利