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原文传递一种酶法制备头孢丙烯中酶蛋白残留的检测方法

专利名称：	一种酶法制备头孢丙烯中酶蛋白残留的检测方法
摘要：	本发明提供一种酶法制备头孢丙烯中酶蛋白残留的检测方法，其特征在于：包括准备考马斯亮蓝G‑250染液及标准蛋白储备溶液；以碳酸氢钠溶液为溶剂制备标准曲线溶液；以碳酸氢钠溶液为溶剂制备空白溶液；以碳酸氢钠溶液为溶剂制备供试品测定溶液；使用紫外分光光度计，通过空白溶液校正，绘制吸光度‑蛋白浓度的标准曲线；再根据供试品测定溶液读取的吸光度值，计算出供试品所含酶蛋白残留含量。本发明通过巧妙地选取碳酸氢钠作为溶剂，既能溶解头孢丙烯，同时又充分溶解酶蛋白，可以有效测出酶法制备头孢丙烯产品中酶蛋白的残留量，提高药品用药安全，检测方法操作简单、准确性高，重现性、可靠性好。
专利类型：	发明专利
申请人：	广药白云山化学制药(珠海)有限公司
发明人：	李庆;关晴
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T03:00:00+0805
申请号：	CN201911368630.3
公开号：	CN110954392A
代理机构：	广州骏思知识产权代理有限公司
代理人：	龙婷;卢娟
分类号：	G01N1/38;G01N21/33;G;G01;G01N;G01N1;G01N21;G01N1/38;G01N21/33
申请人地址：	519180 广东省珠海市斗门区珠峰大道西六号316室
主权项：	1.一种酶法制备头孢丙烯中酶蛋白残留的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：准备考马斯亮蓝G-250染液及标准蛋白储备溶液；标准曲线溶液的制备：取标准蛋白储备溶液，分别以相同浓度不同体积的碳酸氢钠溶液进行稀释，得到各自的标准蛋白线性溶液；各取相同体积的所述考马斯亮蓝G-250染液，分别加入上述的各标准蛋白线性溶液，混匀；放置反应后，即得标准曲线溶液；空白溶液的制备：取与标准曲线溶液制备时相同体积的考马斯亮蓝G-250染液，加入相同浓度的碳酸氢钠溶液，混匀，放置反应后，作为空白溶液；供试品测定溶液的制备：称取头孢丙烯供试品适量，加入相同浓度的碳酸氢钠溶液溶解并稀释得到供试品溶液；取与标准曲线溶液制备时相同体积的考马斯亮蓝G-250染液，加入供试品溶液，混匀，放置反应后，作为供试品测定溶液；使用紫外分光光度计，通过空白溶液校正，采用标准曲线溶液测定吸光度，根据标准曲线溶液中各蛋白线性溶液浓度与吸光度值绘制标准曲线；再根据供试品测定溶液读取的吸光度值，采用标准曲线法计算得到供试品测定溶液中的蛋白浓度，从而计算出供试品所含酶蛋白残留含量。 2.根据权利要求1所述的酶法制备头孢丙烯中酶蛋白残留的检测方法，其特征在于：还包括以下步骤：考马斯亮蓝G-250染液的制备：称取考马斯亮蓝G-250溶于乙醇中，然后再加入适量磷酸，最后用纯化水定容；标准蛋白储备溶液的制备：称量牛血清白蛋白适量，用纯化水溶解稀释得到标准蛋白储备溶液。 3.根据权利要求2所述的酶法制备头孢丙烯中酶蛋白残留的检测方法，其特征在于：所述考马斯亮蓝G-250染液的制备过程中，考马斯亮蓝G-250的重量、乙醇体积、磷酸体积和定容体积之比为5g：(2～3)L：(5～6)L：50L。 4.根据权利要求1所述的酶法制备头孢丙烯中酶蛋白残留的检测方法，其特征在于：所述标准蛋白储备溶液浓度为0.1～5mg/ml，所述供试品溶液浓度为5～100mg/ml。 5.根据权利要求1所述的酶法制备头孢丙烯中酶蛋白残留的检测方法，其特征在于：所述碳酸氢钠溶液的浓度为1％～15％g/ml。 6.根据权利要求1所述的酶法制备头孢丙烯中酶蛋白残留的检测方法，其特征在于：空白溶液制备时的放置反应时间、标准曲线溶液制备时的放置反应时间与供试品测定溶液制备时放置反应时间相同；标准曲线溶液制备时加入考马斯亮蓝G-250染液中的标准蛋白线性溶液的体积、供试品测定溶液制备时加入考马斯亮蓝G-250染液中的供试品溶液的体积、以及空白溶液制备时加入的碳酸氢钠溶液体积三者相等。 7.根据权利要求1所述的酶法制备头孢丙烯中酶蛋白残留的检测方法，其特征在于：空白溶液制备时的放置反应时间、标准曲线溶液制备时的放置反应时间与供试品测定溶液制备时的放置反应时间均为2～20分钟。 8.根据权利要求1所述的酶法制备头孢丙烯中酶蛋白残留的检测方法，其特征在于：使用所述紫外分光光度计时选择波长范围为590～600nm。 9.根据权利要求1所述的酶法制备头孢丙烯中酶蛋白残留的检测方法，其特征在于：制备标准蛋白线性溶液至少五份。 10.根据权利要求1所述的酶法制备头孢丙烯中酶蛋白残留的检测方法，其特征在于：考马斯亮蓝G-250染液的制备方法是：称取100mg考马斯亮蓝G-250，溶于40～60ml乙醇中，加入磷酸100-120ml，最后用纯化水定容至1000ml；所述标准蛋白储备溶液浓度为0.1～5mg/ml，标准蛋白线性溶液的浓度分别是：25μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、600μg/ml、800μg/ml、1000μg/ml，所述碳酸氢钠溶液的浓度c为1％～15％(g/ml)；所述供试品溶液浓度为5～100mg/ml；空白溶液制备时的放置反应时间、标准曲线溶液制备时的放置反应时间与供试品测定溶液制备时的放置反应时间均为2～20分钟，标准曲线溶液、空白溶液以及供试品测定溶液所采用考马斯亮蓝G-250染液体积均为5～25ml，标准曲线溶液制备时加入考马斯亮蓝G-250染液中的标准蛋白线性溶液的体积、供试品测定溶液制备时加入考马斯亮蓝G-250染液中的供试品溶液的体积、以及空白溶液制备时加入的碳酸氢钠溶液体积均为10～250μL。
所属类别：	发明专利