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原文传递一种用于遗传代谢病中氨基酸含量检测方法

专利名称：	一种用于遗传代谢病中氨基酸含量检测方法
摘要：	本发明涉及一种用于遗传代谢病中氨基酸含量检测方法，利用高效液相色谱法及近红外光谱法对血清中含有的氨基酸进行检测，检测方法为：高效液相色谱条件设定、供试品溶液的制备、对照品溶液的制备；近红外光谱采集、近红外光谱数据模型建立。该方法首次建立了近红外光谱方法检人体血清中各种氨基酸成分定量数据模型，实现了多种成分的检测，为氨基酸的含量检测提供了一种快速高效的测定方法，提供了一种氨基酸成分的稳定性的定量考察方法，具有专属性强、线性关系良好、误差极小等优点。
专利类型：	发明专利
申请人：	贵州医科大学
发明人：	潘卫;张競之;肖子文;李琴芬;唐瑶;周遵伦;赵丹青;王正蓉;朱科静;钱雯
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T16:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T14:00:00+0805
申请号：	CN201911292710.5
公开号：	CN111007034A
代理机构：	贵阳贵知知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	曾香兰;蒋琳琳
分类号：	G01N21/359;G01N30/02;G01N30/14;G;G01;G01N;G01N21;G01N30;G01N21/359;G01N30/02;G01N30/14
申请人地址：	550001 贵州省贵阳市云岩区北京路4号
主权项：	1.一种用于遗传代谢病中氨基酸含量检测方法，其特征在于，利用高效液相色谱法及近红外光谱法对血清中含有的氨基酸进行检测，具体检测方法为：高效液相色谱条件设定、供试品溶液的制备、对照品溶液的制备；近红外光谱采集、近红外光谱数据模型建立。 2.根据权利要求1所述的氨基酸含量检测方法，其特征在于，所述血清中含有的氨基酸进行检测具体是指以下氨基酸：天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸及赖氨酸。 3.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱条件设定为：Agilent C18柱规格为：250mm×4.6mm，5μm，进样量5～10μL，体积流量1mL/min，柱温20～30℃，检测波长254nm；流动相A相乙腈，B相水，进行梯度洗脱，具体洗脱程序为：0min,100％B,0％A；0-20min,100-70％B,0-30％A；20min,70％B,30％A；20-30min,70％-20％B,30％-80％A；30min,20％B,80％A。 4.根据权利要求3所述的含量检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱条件设定为：Agilent C18柱规格为：250mm×4.6mm，5μm，进样量10μL，体积流量1mL/min，柱温25℃，检测波长254nm；流动相A相乙腈，B相水，进行梯度洗脱，具体洗脱程序为：0min,100％B,0％A；0-20min,100-70％B,0-30％A；20min,70％B,30％A；20-30min,70％-20％B,30％-80％A；30min,20％B,80％A。 5.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备方法为：精密吸取血清100～200μL置于1.5mL离心管中，准确加入30μL0.63mg/mL的γ-氨基丁酸储备液，加入400～600μL 3％磺基水杨酸溶液，漩涡混匀60s，10000r/min转速离心25-30min，上清液待用，衍生化反应精密吸取处理后血清上清液150～250μL，置1.5mL离心管中，准确加入20μL浓度0.63mg/mL茶氨酸储备液，加入V/V＝1:1的30～50μL三乙胺乙腈溶液，加入100～150μL乙腈溶液，加入100～150μL异硫氰酸苯酯乙腈溶液，混匀，于36～40℃水浴锅中衍生1h～1.5h，然后加入350～450μL正己烷，振摇后放置10min，取下层溶液，过0.22μm滤膜，即得。 6.根据权利要求5所述的含量检测方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备方法为：精密吸取血清150μL置于1.5mL离心管中，准确加入30μL0.63mg/mL的γ-氨基丁酸储备液，加入500μL 3％磺基水杨酸溶液，漩涡混匀60s，10000r/min转速离心28min，上清液待用，衍生化反应精密吸取处理后血清上清液200μL，置1.5mL离心管中，准确加入20μL浓度0.63mg/mL茶氨酸储备液，加入V/V＝1:1的40μL三乙胺乙腈溶液，加入120μL乙腈溶液，加入120μL异硫氰酸苯酯乙腈溶液，混匀，于38℃水浴锅中衍生1h，然后加入400μL正己烷，振摇后放置10min，取下层溶液，过0.22μm滤膜，即得。 7.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于，所述对照品溶液的制备方法为：取天冬氨酸对照品，加0.1mol/ml盐酸溶解至浓度为1mg/ml，备用；取谷氨酸对照品，加0.1mol/ml盐酸溶解至浓度为1mg/ml，备用；取丝氨酸对照品，加0.1mol/ml盐酸溶解至浓度为1mg/ml，备用；取甘氨酸对照品，加0.1mol/ml盐酸溶解至浓度为1mg/ml，备用；取组氨酸对照品，加0.1mol/ml盐酸溶解至浓度为1mg/ml，备用；取精氨酸对照品，加0.1mol/ml盐酸溶解至浓度为1mg/ml，备用；取苏氨酸对照品，加0.1mol/ml盐酸溶解至浓度为1mg/ml，备用；取丙氨酸对照品，加0.1mol/ml盐酸溶解至浓度为1mg/ml，备用；取脯氨酸对照品，加0.1mol/ml盐酸溶解至浓度为1mg/ml，备用；取酪氨酸对照品，加0.1mol/ml盐酸溶解至浓度为1mg/ml，备用；取缬氨酸对照品，加0.1mol/ml盐酸溶解至浓度为1mg/ml，备用；取蛋氨酸对照品，加0.1mol/ml盐酸溶解至浓度为1mg/ml，备用；取异亮氨酸对照品，加0.1mol/ml盐酸溶解至浓度为1mg/ml，备用；取亮氨酸对照品，加0.1mol/ml盐酸溶解至浓度为1mg/ml，备用；取苯丙氨酸对照品，加0.1mol/ml盐酸溶解至浓度为1mg/ml，备用；取色氨酸对照品，加0.1mol/ml盐酸溶解至浓度为1mg/ml，备用；取赖氨酸对照品，加0.1mol/ml盐酸溶解至浓度为1mg/ml，备用；取组氨酸对照品，加0.1mol/ml盐酸溶解至浓度为1mg/ml，备用；取组氨酸对照品，加0.1mol/ml盐酸溶解至浓度为1mg/ml，备用；将制备的对照品溶液取冬氨酸20ul、谷氨酸65ul、丝氨酸60ul、甘氨酸80ul、组氨酸330ul、精氨酸220ul、苏氨酸40ul、丙氨酸120ul、脯氨酸60ul、酪氨酸50ul、缬氨酸60ul、蛋氨酸65ul、异亮氨酸28ul、亮氨酸270ul、苯丙氨酸65ul、色氨酸50ul及赖氨酸125ul的混合对照品储备液的混合对照品储备液配成多种成分的混合对照品溶液。 8.根据权利要求8所述的含量检测方法，其特征在于，近红外光谱采集方法为：全光谱波数范围10000～4000cm-1，光学分辨率为8cm-1，扫描次数为64次，采集光谱时，将5mm比色皿放入透射模块样品池中，以水为背景，每个样本重复采集3次光谱，求其平均值作为原始光谱.以天冬氨酸为例简述模型建立，采用二阶导函数和Norris滤波对光进行预处理，之后选择4173-4694cm-1，5561-5735cm-1，7798-7967cm-1，8646-8816cm-1四个区间，选用联合区间偏最小二乘法siPLS建立数据模型，校正集均方差RMSEC为0.00005，相关系数RMC-r为0.9927，预测均方差RMSEP为0.00010，相关系数RMP-r为0.9984。
所属类别：	发明专利