详情

原文传递一种用于检测抗人体髓鞘碱性蛋白抗体的试剂盒及其应用

专利名称：	一种用于检测抗人体髓鞘碱性蛋白抗体的试剂盒及其应用
摘要：	本发明涉及一种用于检测抗人体髓鞘碱性蛋白(MBP)抗体的试剂盒及其应用以及所述试剂盒用于抗人体髓鞘碱性蛋白抗体检测的方法，属于免疫检测领域。本发明提供了一种全新的患者血清或脑脊液中抗MBP自身抗体的检测方法，该方法通过MBP过表达载体构建、细胞转染、细胞免疫荧光检测等技术，进行抗体定性和滴度测定。本方法具有检测效率高，特异性强等特点。成功地解决了免疫印迹和酶联免疫吸附法中常见的检测结果假阳性或假阴性的问题，具有十分重要的临床应用价值。
专利类型：	发明专利
申请人：	天津天海新域生物科技有限公司
发明人：	施福东;李敏淑;金薇娜;么阳;李治国
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T18:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T01:00:00+0805
申请号：	CN201911309884.8
公开号：	CN111089972A
代理机构：	北京林达刘知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	刘新宇;李茂家
分类号：	G01N33/68;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/68
申请人地址：	300380 天津市西青区中北镇万卉路新城市中心写字楼C座5楼602
主权项：	1.一种用于检测抗人体髓鞘碱性蛋白抗体的试剂盒，其特征在于，包括表达髓鞘碱性蛋白基因的细胞、第二抗体、标记物；其中，所述第二抗体为抗人抗体，所述标记物可与所述第二抗体直接相连或间接相连；并且，当所述标记物与所述第二抗体接触时，所述标记物产生荧光或发生荧光猝灭。 2.根据权利要求1所述用于检测抗人体髓鞘碱性蛋白抗体的试剂盒，其特征在于，与所述第二抗体相连的基团不同于与所述标记物相连的基团；可选的，所述第二抗体与生物素或链霉亲和素相连，所述标记物与链霉亲和素或生物素相连。 3.根据权利要求1或2所述用于检测抗人体髓鞘碱性蛋白抗体的试剂盒，其特征在于，所述标记物选自异硫氰酸荧光素，罗丹明，四甲基罗丹明异硫氰酸盐，Texas Red，藻红蛋白，碘化丙啶，Alexa Fluor系列，Dylight系列，iFluor系列。 4.根据权利要求1～3任一项所述用于检测抗人体髓鞘碱性蛋白抗体的试剂盒，其特征在于，所述表达髓鞘碱性蛋白基因的细胞表达髓鞘碱性蛋白基因，所述髓鞘碱性蛋白基因的核苷酸序列为如SEQ ID NO：4所示的序列。 5.根据权利要求1～4任一项所述用于检测抗人体髓鞘碱性蛋白抗体的试剂盒，其特征在于，所述表达髓鞘碱性蛋白基因的细胞为转有携带髓鞘碱性蛋白基因表达载体pLV-EGFP(2A)Puro-MBP-V1的细胞；其中，所述基因表达载体的核苷酸序列为如SEQ ID NO：3所示的序列。 6.根据权利要求1～5任一项所述用于检测抗人体髓鞘碱性蛋白抗体的试剂盒，其特征在于，所述表达髓鞘碱性蛋白基因的细胞的制备方法包括：髓鞘碱性蛋白基因载体构建质粒；准备细胞用于转染；质粒转染细胞；病毒培养、收集及病毒滴度测定；病毒感染及细胞筛选。 7.根据权利要求6所述用于检测抗人体髓鞘碱性蛋白抗体的试剂盒，其特征在于，在所述髓鞘碱性蛋白基因载体构建质粒的步骤中，使用PCR法获取所述髓鞘碱性蛋白基因，在所述PCR法中使用的引物对的序列为如SEQ ID NO：1所示的序列和如SEQ ID NO：2所示的序列。 8.根据权利要求7所述用于检测抗人体髓鞘碱性蛋白抗体的试剂盒，其特征在于，所述质粒转染细胞步骤进一步包括加入混合质粒的步骤；所述混合质粒优选为质量比为目标质粒：VSVG质粒：REV质粒＝5：3：2的混合质粒。 9.根据权利要求7所述用于检测抗人体髓鞘碱性蛋白抗体的试剂盒，其特征在于，所述病毒感染及细胞筛选步骤包括：通过药物和/或单细胞克隆分选，筛选，获得表达髓鞘碱性蛋白基因的稳定细胞；任选的，所述药物包括G418、潮霉素B或嘌呤霉素中的一种或两种以上的组合；优选的，所述药物为嘌呤霉素。 10.一种根据权利要求1-9任一项所述的试剂盒在制备用于诊断多发性硬化的试剂盒中的应用。 11.一种利用根据权利要求1-9任一项所述试剂盒诊断多发性硬化的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：接种所述表达髓鞘碱性蛋白基因的细胞；加入待测样品，使得待测样品和所述表达髓鞘碱性蛋白基因的细胞接触第二抗体；加入标记物；通过所述检测细胞和所述待测样品产生的荧光强度，和对荧光强度强弱进行分析，诊断是否发生多发性硬化。
所属类别：	发明专利