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原文传递一种液质联用测定人血浆中尼美舒利浓度的方法

专利名称：	一种液质联用测定人血浆中尼美舒利浓度的方法
摘要：	本发明目的在于提供一种可以准确测定人血浆中尼美舒利浓度的方法，该方法包括：(1)工作曲线样品的制备；(2)质控样品的制备(3)血浆样品的前处理；(4)LC‑MS/MS分离分析；(5)采用内标法，以系列尼美舒利在基质中的浓度为横坐标，尼美舒利与内标甲苯磺丁脲的峰面积比为纵坐标，通过使用权重因子1/x2，线性回归得到理论浓度与响应之间的线性关系进行定量。本发明的方法具有专属性强、准确度和灵敏度高的特性。
专利类型：	发明专利
申请人：	南京希麦迪医药科技有限公司
发明人：	吴昱;周振东;刘虹霞;蒋媛媛;武晋宇;高峰
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T05:00:00+0805
申请号：	CN201911357041.5
公开号：	CN111103381A
代理机构：	连云港联创专利代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	谷金颖
分类号：	G01N30/88;G01N30/86;G01N30/06;G01N30/72;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/88;G01N30/86;G01N30/06;G01N30/72
申请人地址：	210000 江苏省南京市江宁区科学园芝兰路18号
主权项：	1.一种液质联用测定人血浆中尼美舒利浓度的方法，其特征在于，该方法包括： (1)工作曲线样品的制备：包括内标溶液的配制、标准系列溶液的配制、工作曲线样品的前处理，其中，内标溶液的配制为称取适量的甲苯磺丁脲标准品，经质量校正因子校正后，将其溶于DMSO中，得到储备液,再用乙腈将储备液稀释成为240ng/mL的内标工作液；标准系列溶液的配制为称取适量的尼美舒利标准品，经质量校正因子校正后，将其溶于DMSO中，得到储备液，再用50％乙腈水溶液稀释成为不同浓度的系列标准曲线工作液；工作曲线样品的前处理为向190μL空白血浆中分别加入10.0μL的本步骤上述系列标准曲线工作液，配制成相当于尼美舒利在血浆基质中的浓度为1.00、2.00、20.0、200、400、1000、1800和2000ng/mL的标准血浆样品，然后每个浓度以50.0μL为单位，分装出2份；每份加入350μL的内标工作液进行蛋白沉淀，离心后取60.0μL上清液，加入240μL的20％乙腈水溶液，震荡离心后，供LC-MS/MS测定； (2)质控样品的制备：包括质控系列溶液的配制、质控样品的前处理，其中，质控系列溶液的配制为称取适量的尼美舒利标准品，经质量校正因子校正后，将其溶于DMSO中，得到储备液，再用50％乙腈水溶液稀释成为高浓度质控工作液、中浓度质控工作液、算数中浓度质控工作液、低浓度质控工作液和定量下限质控工作液的系列质控工作液；质控样品的前处理为向380μL空白血浆中分别加入20.0μL的上述系列用于质控样品配制的系列质控工作溶液，配制相当于尼美舒利在血浆基质中的浓度为1600ng/mL的高浓度质控、800ng/mL的中浓度质控、100ng/mL的算数中浓度质控、3.00ng/mL的低浓度质控和1.00ng/mL的定量下限质控的质控血浆样品，然后每个浓度以50.0μL为单位，分装出6份；每份加入350μL的内标工作液进行蛋白沉淀，离心后取60.0μL上清液，加入240μL的20％乙腈水溶液，震荡离心后，供LC-MS/MS测定； (3)血浆样品的前处理：取受试者的血浆加入内标工作液进行蛋白沉淀，离心后取上清液，加入20％乙腈水溶液，震荡离心后，供LC-MS/MS测定； (4)采用内标法定量，对人血浆中尼美舒利的浓度进行测定。 2.根据权利要求1所述的液质联用测定人血浆中尼美舒利浓度的方法，其特征在于，所述步骤(1)的标准系列溶液的配制中，用50％乙腈水溶液稀释储备液得到的不同浓度的系列标准曲线工作液，其浓度分别为20.0、40.0、400、4000、8000、20000、36000和40000ng/mL。 3.根据权利要求1所述的液质联用测定人血浆中尼美舒利浓度的方法，其特征在于，所述步骤(2)的质控系列溶液的配制中，高浓度质控工作液浓度为32000ng/mL、中浓度质控工作液浓度为16000ng/mL、算数中浓度质控工作液浓度为2000ng/mL、低浓度质控工作液浓度为60.0ng/mL和定量下限质控工作液浓度为20.0ng/mL。 4.根据权利要求1所述的液质联用测定人血浆中尼美舒利浓度的方法，其特征在于，所述步骤(3)具体为：取受试者的血浆50.0μL，每份加入350μL内标工作液进行蛋白沉淀，离心后取60.0μL上清液，加入240μL的20％乙腈水溶液，震荡离心后，供LC-MS/MS测定。 5.根据权利要求1所述的液质联用测定人血浆中尼美舒利浓度的方法，其特征在于，所述步骤(4)中，采用内标法，以系列尼美舒利在血浆基质中的浓度为横坐标，尼美舒利与内标甲苯磺丁脲的峰面积比为纵坐标，进行线性回归运算，权重因子为1/x2，得到线性回归方程，即为工作曲线，对人血浆中尼美舒利的浓度进行测定。 6.根据权利要求1至5中任一项所述的液质联用测定人血浆中尼美舒利浓度的方法，其特征在于，所述LC-MS/MS测定的条件包括：液相色谱条件：色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm(50x 2.1mm)；流动相：A＝0.1％甲酸水溶液；B＝乙腈溶液，梯度如下： 0-0.80min，流动相A为75.0％，流动相B为25.0％；0.80-0.90min，流动相A从75.0％到40％，流动相B从25.0％到60.0％；0.90-2.00min，流动相A保持为40.0％，流动相B保持为60.0％；2.00-2.10min，流动相A从40.0％到10.0％，流动相B从60.0％到90.0％；2.10-2.80min，流动相A保持为10.0％，流动相B保持为90.0％；2.80-3.00min，流动相A从10.0％到75.0％，流动相B从90.0％到25.0％；3.00-3.80min，流动相A保持为75.0％，流动相B保持为25.0％；流速：0.500mL/min；柱温：40℃；进样量：10.0μL；质谱检测器及条件：离子源为电喷雾离子源；喷雾电压为-4500V；离子源温度：450℃；帘气：20psi，碰撞气：9psi，GS1：40psi，GS2：40psi；负离子方式检测；扫描方式：MRM；尼美舒利定量离子对为307.0→229.1，碰撞电压为-22.0eV；内标甲苯磺丁脲定量离子对为269.1→169.9，碰撞电压为-15.0eV。
所属类别：	发明专利