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原文传递一种肝素中细菌内毒素的检测方法

专利名称：	一种肝素中细菌内毒素的检测方法
摘要：	本发明涉及一种肝素中细菌内毒素的检测方法，方法包括：Step1：用细菌内毒素检查用水溶解细菌内毒素标准品；Step2：用细菌内毒素检查用水稀释细菌内毒素标准品溶液至0.01‑5EU/mL范围内；Step3：用细菌内毒素检查用水溶解动态浊度法鲎试剂；Step4：将Step2配制的细菌内毒素标准品溶液取于反应容器中，加鲎试剂，置于内毒素检测仪检测；Step5：配制样品溶液；Step6：配制加标样品溶液：将样品溶液和细菌内毒素标准品溶液，混匀即得；Step7：取Step5中配制的样品溶液和Step6中配置的加标样品溶液分别置于两个反应容器中，分别加入Step3中制备的鲎试剂，置于内毒素检测仪检测。
专利类型：	发明专利
申请人：	常州千红生化制药股份有限公司
发明人：	恽卫东;陶翎;张贵莲
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T14:00:00+0805
申请号：	CN201911368755.6
公开号：	CN111007253A
代理机构：	北京智丞瀚方知识产权代理有限公司
代理人：	白月霞
分类号：	G01N33/579;G01N1/28;G01N1/38;G;G01;G01N;G01N33;G01N1;G01N33/579;G01N1/28;G01N1/38
申请人地址：	213000 江苏省常州市新北区云河路518号
主权项：	1.一种肝素中细菌内毒素的检测方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤： Step1：用细菌内毒素检查用水溶解细菌内毒素标准品，置于混悬器上混悬5min； Step2：用细菌内毒素检查用水稀释细菌内毒素标准品溶液至0.01-5EU/mL范围内； Step3：用细菌内毒素检查用水溶解动态浊度法鲎试剂； Step4：将Step2配制的细菌内毒素标准品溶液取于反应容器中，加鲎试剂，置于内毒素检测仪检测； Step5：配制样品溶液：细菌内毒素检查用水配制样品溶液；配制样品溶液的溶液浓度为3～10IU/mL；所述样品包括肝素或低分子肝素；肝素包括肝素钠和肝素钙，低分子肝素包括依诺肝素钠、达肝素钠、那屈肝素钙； Step6：配制加标样品溶液：将样品溶液和细菌内毒素标准品溶液，混匀即得； Step7：取Step5中配制的样品溶液和Step6中配置的加标样品溶液分别置于两个反应容器中，分别加入Step3中制备的鲎试剂，置于内毒素检测仪检测。 2.根据权利要求1所述的肝素中细菌内毒素的检测方法，其特征在于：Step1中的细菌内毒素含量小于0.005EU/mL；细菌内毒素标准品的稀释方法中，每2-10倍稀释为一个检测点。 3.根据权利要求2所述的肝素中细菌内毒素的检测方法，其特征在于：Step2中所述细菌内毒素标准品的稀释方法中，稀释的检测点的具体浓度梯度及体积为：1EU/mL 0.7mL，0.2EU/mL 1.8mL，0.1EU/mL 1mL，0.02EU/mL 1.4mL，0.01EU/mL 1.2mL；所述细菌内毒素标准品的稀释方法中，稀释时，混匀时间为30s。 4.根据权利要求3所述的肝素中细菌内毒素的检测方法，其特征在于：Step4中，将所配制的至少3个浓度梯度细菌内毒素标准品溶液于反应容器中；每个浓度取0.1mL于反应容器中，各加鲎试剂0.1mL，置于内毒素检测仪检测。 5.根据权利要求4所述的肝素中细菌内毒素的检测方法，其特征在于：在内毒素检测仪中的检测方法为：自动混匀5-10s，检测温度37℃±1℃，检测波长405nm。 6.根据权利要求5所述的肝素中细菌内毒素的检测方法，其特征在于：在Step4中，选细菌内毒素检查用水为阴性对照，且当阴性对照的反应时间大于标准曲线最低浓度的反应时间，将全部数据进行线性回归分析，根据线性回归分析，获知标准曲线的相关系数(r)的绝对值。 7.根据权利要求1所述的肝素中细菌内毒素的检测方法，其特征在于：在Step5中，配制样品溶液的溶液浓度为5-7IU/mL。 8.根据权利要求1所述的肝素中细菌内毒素的检测方法，其特征在于：在Step6中，配制加标样品溶液：取等体积的12IU/mL样品溶液和0.2EU/mL细菌内毒素标准品溶液。 9.根据权利要求6所述的肝素中细菌内毒素的检测方法，其特征在于：在Step7中，取Step5中配制的样品溶液和Step6中配置的加标样品溶液各0.1mL分别置于两个反应容器中，分别加入0.1m Step3中制备的鲎试剂，置于内毒素检测仪检测，自动混匀5-10s，检测温度37℃±1℃，检测波长405nm。 10.根据权利要求9所述的肝素中细菌内毒素的检测方法，其特征在于：用Step4绘制的标准曲线标定待测样品中细菌内毒素含量和加标样品中细菌内毒素含量。
所属类别：	发明专利